اهمیت زیادی در توسعه ویرولوژی، معرفی روش های کشت ویروس در جنین های مرغ بود. برای بازتولید ویروس، جنین مرغ 7-12 روزگی، انکوباتور در یک ترموستات در 37 درجه سانتیگراد، پیش نیاز برای توسعه مناسب جنین، رطوبت خاصی را مشاهده می کند که می تواند با قرار دادن یک کشتی با آب به داخل ایجاد شود ترموستات کشت ویروس ها در جنین های مرغ در مکان های مختلف جنین انجام می شود که آلوده می شوند:
1) در پوسته Chorion-Allantomic؛
2) به حفره ایلوتیک؛
3) در حفره آمنیوتیک؛
4) در کیسه یولک.
عفونت جنین های مرغ در بوکس با استفاده از ابزارهای استریل انجام می شود. قبل از: عفونت، جنین های مرغ دو دست با یک سواب پنبه ای، با الکل مرطوب می شود.
عفونت در پوسته کوریون-آلنتومیک. پس از ضدعفونی، تخم مرغ به آرامی یک قطعه پوسته را از انتهای احمقانه بریزید، یک پوسته فوق العاده را بردارید - در عین حال پوسته پوسته پوسته پوسته شدن تشخیص داده می شود. مواد عفونی در مقدار 0.1-0.2 میلی لیتر با یک سرنگ یا parser pipette به پوسته Chorion-allantomic اعمال می شود. پس از عفونت، کلاه باز است و لومن بین آن و جنین مرغ با پارافین ریخته می شود. در طرف دیگر تخم مرغ، یک مداد ساده نام مواد عفونی و تاریخ عفونت نوشته شده است.
عفونت در حفره آمنیوتیک.تخم مرغ در حال شناختن است و در کنار طرف، یک طرح را انتخاب کنید که در آن Chorion-Allantois از رگ های خون بزرگ محروم است. این سایت توسط یک مداد جشن گرفته می شود. تخم مرغ بر روی یک ایستاده در موقعیت افقی قرار می گیرند، ضد عفونی کننده و اسبهای ویژه ای استریل سوراخ سوراخ سوراخ می شوند وپوسته به عمق 2-3 میلیمتر، که از طریق آن سوزن با مواد عفونی به طور مستقیم به حفره آمنیوتیک معرفی می شود. برای اینکه مایع تزریقی به عقب برگردد، قبل از ساخت یک سوراخ بر روی کیسه هوا. پس از آن، هر دو سوراخ با پارافین ریخته می شود.
عفونت در حفره Allantomic.عفونت تولید و سایه دار بوکس. فضای هوایی اشاره شده است، پوسته بالای فضای هوایی ضد عفونی شده و از طریق سوراخ در پوسته به سمت سوزن جنین سرنگ با مواد معرفی می شود. اگر سوزن به داخل حفره آلونتومیک افتاد، تغییر سایه جنین مشاهده می شود. پس از عفونت، سوراخ با پارافین ریخته می شود.
عفونت، در کیسه زرده.پوسته ضد عفونی تخم مرغ بر روی پایه قرار می گیرد و انتهای خفیف به سمت راست به طوری که برچسب های خسته کننده تبدیل می شوند. بیش از محفظه هوا در مرکز سوراخ سوراخ سوراخ. از طریق سوراخ در پوسته پوسته در پوسته در جهت افقی به عمق 2-3 میلی متر، یک سوزن سرنگ معرفی شده است، که به کیسه زرده می افتد. این ماده در حجم 0.2-0.3 میلی لیتر تزریق می شود. پس از تزریق مواد، سوراخ پارافین است.
رژیم دما و مدت انکوباسیون به خواص بیولوژیکی این ویروس بستگی دارد. تخم مرغ های آلوده روزانه، Haggard برای آزمایش قابلیت حیات جنین بررسی می شوند. اگر جنین ها در روز اول از بین بروند، دلیل این امر معمولا در آلوده شدن آسیب دیده است. چنین تخم مرغ از تجربه مشتق شده است. حضور یک ویروس در جنین آلوده توسط تغییرات مشخصی در پوسته کورونی-آهنری یک جنین مرغ آلوده تعیین می شود. ویروس هایی که فعالیت همگانینی را ندارند با استفاده از RSK شناسایی می شوند. برای شناسایی ویروس در مایعات آمیخته یا آمنیوتیک جنین های آلوده، RGA را قرار دهید.
اکثر ویروس های شناخته شده توانایی ضرب در جنین مرغ را دارند (شکل 4). جنین های 8 تا 14 روز با توجه به نوع ویروس، روش آلودگی و وظایف مطالعه مورد استفاده قرار می گیرند. ویروس های آنفلوآنز در 9-10، واکسن OPS - در 12، vapotitis - در جنین های مرغ 7 روزه کشت می شود. بازتولید ویروس در جنین های مرغ در قسمت های مختلف جنین رخ می دهد که با ویژگی های تروپیزم ویروس همراه است. روش کشت ویروس در جنین مرغ به طور گسترده ای در کشت صنعتی استفاده می شود.
ساختار جنین مرغ و روش های عفونت آن: 1 - در Amnion؛ 2 - به حفره Allantomic؛ 3 - در کیسه خسته کننده. (میکروبیولوژی و ایمونولوژی ویرایش شده توسط Vorobiev A.A. - M.S. - 1999).
بیشترین پوسته فوق العاده در فضای باز در جهان، مجاور پوسته یا پارچه های مادر و به همین دلیل خدمت به سایت مبادله بین جنین و محیط اطراف آن، نامیده می شود کوروندر گونه های، تخم مرغ ها، عملکرد اصلی کوریون، اجرای تبادل گاز تنفسی است. در پستانداران، کوریون در تنفس و تغذیه، انزوا، فیلتراسیون و سنتز مواد دخیل است. در موجودات ابتدایی، کورون یک پوسته ثانویه است و پاکت پیشرفته جنین. حفره بین کوریون و آمنیون chorionniotic است.
امیون(یونانی. Amnion)، یک کیسه آمنیوتیک یا پوسته آبی یکی از جنین های جنینی از خزندگان، پرندگان، پستانداران است.
آمنیون تکاملی برای محافظت از جنین ها از خشک شدن در طول توسعه خارج از محیط آبی ظاهر شد. بنابراین، حیوانات مهره ای که تخم ها را به تعویق می اندازند (خزندگان و پرندگان)، و همچنین پستانداران که از خزندگان رخ داده اند متعلق به گروه Amniota ("حیوانات با پوسته تخم مرغ") است. کلاس های پیشین و مهره داران (بریده، چراغ جلو، ماهی، دوزیستان) خاویار را به محیط آبزی می اندازند، بنابراین آنها به پوسته آب نیاز ندارند. این کلاس های حیوانات به گروه Anamm متصل می شوند. بر خلاف آنامان، آمنیوتام نیازی به یک محیط آب برای پرورش و توسعه اولیه ندارد، بنابراین آمنیوت ها به بدن های آب وابسته نیستند. این شامل نقش تکاملی Amnion است.
در طی تولد پستانداران، تخریب آب آبی، آب از بین می رود و بقایای آمنیون بر روی بدن نوزادان اغلب به نام "پیراهن" نامیده می شود، که در همه جا برای مدت طولانی نشانه ای از موفقیت است و دیگر خرافات (از این رو، به ویژه، روسیه در مورد کسانی که "در Shurbach متولد شده").
Allantois (از یونانی Allantoeid؟ s - سوسیس) بدن جنینی از مهره داران بالاتر است؛ پوسته ژینی که از پشت جنین توسعه می یابد. علاوه بر این، Allantois در تبادل گاز جنین با محیط زیست و انتشار ضایعات مایع شرکت می کند. Allantois، همراه با سایر پوسته های جنینی - آمنیون و کورون، یک نشانه تعیین کننده از مهره داران بالاتر - پستانداران، پرندگان و خزندگان است.
در پرندگان و خزندگان متعلق به تخم مرغ، Allantois در اطراف جنین در امتداد دیوارهای پوسته توسعه می یابد. در لایه بیرونی آن، Mesoderm نامیده می شود، آن را یک شبکه گسترده ای از رگ های خونی ایجاد می کند که با آن تعامل با محیط خارجی اتفاق می افتد. در پستانداران، Allantois بخشی از بند ناف است.
راه های متعددی برای آلوده شدن جنین مرغ در حال رشد وجود دارد: در پوسته کورونلاتیک، به حفره های آلوده و آمنیوتیک، کیسه های خسته کننده، بدن جنین.
عفونت برای پوسته ChorionAlantic برای جداسازی و کشت ویروس های تشکیل پلاک بر پوسته ها (ویروس های واکسن، قطعات طبیعی، تبخال ساده) استفاده می شود. قبل از عفونت، تخم مرغ ها با یک محصول تغییر می کنند، مداد توسط مرز فضای هوایی و پوسته ChorionAlantic مشخص می شود. سطح تخم مرغ بالای فضای هوایی و در محل عفونت با الکل پاک می شود، سوختگی، پردازش شده با ید و سوراخ در حفره کیسه هوا را پاک می کند.
در محل عفونت، پوسته برداشته می شود تا به پوسته عالی آسیب برساند، که پس از آن با یک سوزن استریل کوتاه سوراخ می شود، به طوری که به پوسته پوسته پوسته پوسته پوسته پوسته شود. مکیدن روغن کیسه هوا. مواد ویروسی (0.05 - 0.2 میلی لیتر) به پوسته کورونلاتیک با یک سرنگ توبرکولین با یک سوزن کوتاه یا پاپت پاستور اعمال می شود. سوراخ در پوسته با شیشه پوشش استریل یا همان قطعه پوسته خرد شده بسته شده و پارافین مذاب در امتداد لبه ها ریخته می شود. جنین های آلوده در پایه به صورت افقی قرار دارند و در ترموستات انکوباتور می شوند. جنین های برجسته ای از 48 ساعت انکوباسیون انجام نمی شود. بر روی پوسته آلوده، لکه های مبهم سفید چشم از اشکال مختلف (پلاک) یافت می شود.
عفونت حفره ای آلوده. ویروس معرفی شده به Allantois در سلول های اندودومال ضرب می شود، سپس به مایع آلوتومیک منتقل می شود. عفونت به روش زیر انجام می شود: در پوسته بیش از محفظه هوا، لبه اسکنر یا قیچی تولید سوراخ کردن، پس از آن سوزن با یک سرنگ از طریق سوراخ در جهت عمودی معرفی می شود، که از طریق پوسته ChorionAlantic عبور می کند و وارد حفره آلوده، مواد به حجم 0.1 میلی لیتر معرفی شده و پارافین سوراخ ریخته می شود.
کیسه های SUGGY. برای این منظور، جنین 5 تا 10 روزه استفاده می شود. دو روش عفونت شایع تر هستند. در اولین ماده از طریق فضای هوایی معرفی شده است. در مرکز تخم های سوراخ، آن را سوراخ می کند، آن را روی ایستاده قرار دهید و به سمت راست بچرخانید و از طریق سوراخ در جهت عمودی، سوزن معرفی شده، به سرنگ متصل شود، سوزن از طریق پوسته ChorionAlantic عبور می کند حفره Allantomic در زرده. شما می توانید از 0.1 تا 0.5 میلی لیتر مواد حاوی ویروس موجود در کیسه خسته کننده وارد کنید. پس از عفونت، سوراخ در پوسته با پارافین ریخته می شود و جنین در ترموستات قرار می گیرد. با توجه به روش دوم در مرز فضای هوایی از طرف دیگر که در آن زرده (احزاب مخالف از جنین) توسط سوراخ پوسته ای ساخته شده است که از طریق آن مواد عفونی تزریق می شود. جهت سوزن باید به مرکز تخم مرغ باشد.
جنین مرغ آلوده به مواد ویروسی که به مدت 2-3 روز در انکوباتور قرار داده شده است، بسته به ماهیت ویروس وارد شده. برای توسعه ویروس از نمونه های گرفته شده در یک بیمار (به عنوان مثال، ترشحات نازوفارنکس مورد استفاده در تشخیص آنفولانزا)، یک جنین مرغ نشان دهنده یک محیط خوب است. با نوع تغییر، بگذارید در بافت پوسته کورونلاتیک بگوییم، شما می توانید به طور مستقیم تعیین کنید که چگونه ویروس ما با آن برخورد می کنیم. تغییرات بسیار مشخصی باعث ویروس های کوچک و تبخال می شود. بعضی از ویروس ها در بافت های مختلف جنین مرغ بسیار شدید هستند و مواد اولیه را برای تهیه آنتی ژنهای ویروسی مورد نیاز با تشخیص آزمایشگاهی بیماری های ویروسی فراهم می کنند. ویروس های بازتولید شده در جنین مرغ به عنوان ماده اولیه برای به دست آوردن هجده گونه واکسن واکسن استفاده می شود.
علیرغم جنبه های مثبت فرهنگ های سلولی که چنین گسترده ای را در آزمایشگاه های مدرن ویروسی دریافت کرده اند، جنین مرغ در بسیاری از موارد، ارزش اولیه خود را حفظ کرده و همچنان به عنوان یک ماده کلاسیک برای کار خدمت می کند. تجزیه ویروس در جنین مرغ توسط مرگ جنین، واکنش مثبت هموگلوتینین بر روی شیشه ای با مایع آلوده یا آمنیوتیک، با تشکیل ضایعات کانونی ("پلاک") بر روی پوسته کورونی-آلورانک ساخته شده است و همچنین در RGA.
هدف، واقعگرایانه: دانش آموزان را با روش های عفونت جنین های مرغ برای کشت ویروس آشنا کنید.
تجهیزات و مواد: جنین های مرغ 9-12 روزه انکوباسیون، اوووشاپ، تامپون های الکل، مخفف جنین، موچین، قیچی، تلهپلاستی، سوزن، سرنگ، مداد ساده، Pobbiers، سوزن، جداول، طرح ها، تجهیزات چند رسانه ای، ارائه نقطه قدرت MS Office در مورد کلاس ها.
به طور قابل توجهی بر تولید مثل ویروس ها در روش جنین عفونت تاثیر می گذارد. قبل از عفونت، تخم مرغ انکوباتور طرفدار بدن، مرده ها جدا می شوند. در پوسته تخم مرغ با جنین های زنده، که آنها بین رنگ قرمز رگ های خونی و حرکت جنین را تشخیص می دهند، مداد با محل عفونت مشخص می شود.
جنین های آلوده در جعبه استریل، داشتن دسکتاپ، دو تابلو، تامین گاز، تامین آب و خلاء. عفونت در حفره آمنیوتیک در یک اتاق تاریک انجام می شود. محل کار باید به خوبی روشن شود. قبل از کار کردن مواد ضد عفونی کننده. برای ضد عفونی سطح تخم مرغ، یک محلول ضد عفونی کننده (70٪ الکل، محلول ید 2٪) و یک چوب چوبی پیچیده شده است، پروب دندانی یا بوتر را برای حفاری پوسته تخم مرغ خم می کند. تخم مرغ ها برای سل ریوی و سوزن های ویژه آلوده شده اند. محل عفونت در تخم مرغ با پارافین ریخته می شود. برای این، چوب پارافین آماده می شود: یک گودال شیشه ای به لوله آزمایشی معرفی می شود، یک گودال شیشه ای، به دنبال آن است که در مرکز آزمایش لوله به خنک کننده پارافین قرار دارد.
هنگامی که پارافین به نیازهای پارافین نیاز دارد، دیوارهای لوله های آزمایش بر روی ریل گرم می شوند و پارافین از لوله پشت سر شیشه ای کشیده می شود. نگه داشتن یک سر و صدا بر روی شعله، ما ملامت تعداد پارافین مورد نیاز برای بستن سوراخ در تخم مرغ. این روش بسیار تمیز است و جفت های پافین شکل نمی گیرند.
علاوه بر این، یک شیشه با سواب های پنبه استریل بر روی دسکتاپ در جعبه قرار می گیرد، یک لیوان با یک راه حل سودا سودا 3٪ برای ابزارهای مورد استفاده و یک راه حل با محلول کلر برای اقلام انباشته استفاده می شود. در مورد نیاز، شما می توانید پشتیبانی از تخم مرغ، یک فنجان کوچک کوچک و رسانه های مواد مغذی استریل را آماده کنید. دسکتاپ آماده شده در این راه برای 1-2 ساعت تحت تابش اشعه ماوراء بنفش قرار دارد.
با توجه به پاتوژنز ویروس های مورد مطالعه، کار منجر به ماسک، دستکش های لاستیکی و عینک محافظ می شود.
شش روش عفونت جنین وجود دارد. عفونت های رایج ترین مورد استفاده در حفره های متفاوتی و در پوسته کورونلاتیک، کمتر - در حفره آمنیوتیک و در کیسه خفیف و کاملا به ندرت - به بدن جنین و در رگ های خونی Hao. انتخاب روش توسط تروپیزم ویروس و همچنین هدف از عفونت تعیین می شود. با هر روش عفونت، 0.1-0.2 میلی لیتر مواد عفونی معرفی شده است.
هنگامی که با این روش آلوده، ویروس های آنفلوانزا، بیماری نیوکاسل، روپونومونی اسب ها، استوماتیت های حسی، و غیره، انواع مختلفی از این روش وجود دارد. انواع مختلفی از این روش وجود دارد.
گزینه اولجنین توسط یک نزولی به صورت عمودی ثابت می شود. در پوسته در سمت جنین، و گاهی اوقات با ژرمین مخالف، طرف 5-6 میلیمتر بالاتر از مرز محفظه هوا، یک سوراخ با قطر حدود 1 میلیمتر ایجاد می کند. سوزن موازی با محور طولی به عمق 10-12 میلیمتر (شکل 16) معرفی شده است. پس از تزریق مواد حاوی ویروس، سوزن برداشته می شود، و سوراخ در پوسته، قطره پارافین استریل مذاب را بسته می کند.
شکل 16. عفونت به حفره آلوده (اولین گزینه) (در نیکولوا)
گزینه دومسوراخ ساخته شده در پوسته بالای محفظه هوا فقط برای خروج از بخشی از هوا استفاده می شود. باز کردن برای عفونت بسیار بر روی سایت منطقه در حال رشد پوسته Chorionallantic (Hao) از طرف جنین ساخته شده است. سوزن به عمق بیش از 2-3 میلی متر معرفی می شود. مایع عفونی را در حجم 0.1-0.2 میلی لیتر تزریق کنید و سوراخ را با پارافین بسته کنید (نگاه کنید به شکل 17).
این روش عفونت جنین های مرغ اغلب برای کشت ویروس های اپیتلتروپیک و پانچربیک از پرندگان، لارنگووتراچیت عفونی پرندگان، طاعون گوشتخوار، بیماری های AUSA، Catarrhal، گوسفند و غیره استفاده می شود.
چنین عفونت را می توان از طریق یک اتاق هوا طبیعی یا مصنوعی انجام داد.
برای عفونت از طریق اتاق هوا طبیعیجنین در یک سه پایه به صورت عمودی ناپدید می شود و در پوسته در برابر مرکز هواپیما، یک پنجره گرد با قطر 15-20 میلی متر برش داده می شود. از طریق این پنجره، موچین ها یک پوسته فوق العاده را حذف می کنند. تعلیق حاوی 0.2 میلیمتری ویروس به بخش برهنه Hao اعمال می شود (شکل 18)، سوراخ با یک نشت پودر یا کمتر با پوشش شیشه ای بسته شده است، آن را با پارافین مذاب تقویت می کند.
عفونت از طریق مصنوعی یک اتاق هوابیشتر از ابتدا اعمال می شود، زیرا تماس با مواد حاوی ویروس با سطح بزرگتر Hao را تضمین می کند و بنابراین منجر به تشکیل ویروس بیشتر می شود.
شکل 17. عفونت جنین مرغ به یک حفره آهن (گزینه دوم) (در نیکولوا)
شکل 18. عفونت در Hao از طریق محفظه هوا طبیعی (با توجه به نیکولوا، و غیره)
شکل 19. عفونت جنین مرغ در هائو از طریق یک اتاق هوا مصنوعی (در نیکولوا و غیره)
برای آلوده شدن جنین، این روش در سه پایه به صورت افقی به صورت افقی قرار می گیرد. دو سوراخ در پوسته ساخته شده است: یکی کوچک از مرکز اتاق هوا (در نظر گرفته شده برای مکش از هوا از آن)، و دیگری با قطر 0.2-0.5 سانتی متر در سمت، از طرف جنین. پیچیدگی روش این است که، سوراخ دوم، لازم است که قطعه قطعه پوسته را در ابتدا برداشت، سپس حرکت کشویی، بدون آسیب رساندن به Hao، پوسته فوقانی را به سمت طرف حرکت می کند تا هوا بتواند عبور کند از طریق نقص حاصل شده. پس از آن، گلابی لاستیکی از طریق سوراخ اول، مکیدن هوا از محفظه هوا طبیعی است (شکل 19، a). در نتیجه، هوا بیرونی در داخل از طریق باز شدن سمت از بین می رود، تشکیل یک اتاق هوا مصنوعی، پایین که هائو است (شکل 19، ب).
از طریق سوراخ جانبی بر روی سطح Hao، مایع عفونی اعمال می شود و سوراخ با یک تکه چسب بسته شده است. برای بستن سوراخ اول لازم نیست، از آنجا که جزوه داخلی پوسته نامناسب در همان زمان روش عفونت نقض نشده است و همچنان به نقش مانع برای میکرو فلور ادامه می دهد.
انکوباسیون بیشتر جنین های آلوده به این روش در یک موقعیت افقی باز می شود.
برای تولید مثل کلامیدیا، آنها عمدتا برای پرورش کلامیدیا، و همچنین ویروس های بیماری مریم، روپونومونی اسب ها، تب Catarrhal گوسفند و غیره استفاده می شود. جنین های 5-7 روزه را آلوده می کند و گاهی اوقات 2-3 روز ( دره دره دره دره دره). از دو نوع عفونت استفاده کنید.
گزینه اولجنین ها در یک سه پایه در یک موقعیت عمودی قرار می گیرند. سوراخ را در پوسته بالای مرکز محفظه هوا ایجاد کنید و به سوزن به عمق 3.5-4 سانتی متر وارد کنید تا زاویه 45 درجه به محور عمودی در جهت مخالف محل جنین (شکل 20) .
شکل 20. عفونت جنین مرغ در کیسه زرده (با توجه به نیکولوا و غیره)
گزینه دومگاهی اوقات یک مسیر مشابه از عفونت بر روی جنین به صورت افقی در سه پایه انجام می شود؛ در عین حال، جنین در پایین است، و زرده بالای آن. سوراخ در پوسته قطره پارافین مذاب بسته می شود.
برای این منظور، جنین 6 تا 10 روزه استفاده می شود. این روش در کشت ویروس های آنفلوانزا، بیماری نیوکاسل، اسب های روپونومونی، و غیره استفاده می شود. دو روش عفونت وجود دارد.
روش بستهعفونت در یک جعبه تاریک انجام می شود. تخم مرغ بر روی یک ogoscope قرار می گیرد در موقعیت افقی جنین. از طریق سوراخ در پوسته بالای هواپیما، یک سوزن با پایان ناپایدار به سمت ژرمین معرفی می شود. اثبات اینکه سوزن نفوذ آمنیون، حرکت بدن جنین در جهت حرکت است.
روش بازپوسته بالای محفظه هوا قطع می شود به طوری که یک پنجره با قطر 1.5-2.5 سانتی متر تشکیل شده است. از طریق آن، یک پوسته چاقو توسط یک موچین تحت کنترل چشم برداشته می شود. سپس آناتومیک (14 سانتیمتر) موچین با شاخه های نزدیک تر، با فشار دادن پوسته کورینالتیک به سمت ژرمین منجر می شود. هنگامی که موچین ها به آن می رسند، شاخه ها تار می شوند، پوسته آمنیوتیک را با هائو ضبط می کنند و به پنجره می رسند. نگه داشتن موچین های دست چپ با یک پوسته ثابت از Amnion، یک ماده حاوی ویروس معرفی شده است (شکل 21). علاوه بر این، تمام پوسته ها کاهش می یابد، پنجره با لکوپلاستی و جنین در یک موقعیت عمودی انکوباتور شده است.
شکل 21. عفونت جنین مرغ در آنیون به صورت باز (به گفته نیکولوا و غیره)
هنگامی که جنین های 11-13 روزه 11-13 روزه، یک رگ بزرگ خون دیده می شود. به گفته وی، طرح پوسته حذف شده است، 1-2 قطره الکل اعمال می شود، که باعث می شود یک پوسته فوق العاده شفاف برای مدتی. تحت کنترل چشم بر روی یک آلودگی، سوزن به یک کشتی معرفی شده است، که توسط تحرک آن با حرکات جانبی کوچک سوزن تایید شده است. طرح برهنه پوسته عالی با یک تکه چسب بسته شده است.
این امکان وجود دارد که مواد را در عروق وارد کنید و یک روش کمی متفاوت باشد: آنها پوسته را بر روی محفظه هوا قطع می کنند، پوسته مکش با الکل پوشیده شده است و مواد که عروق قابل مشاهده است تزریق می شود. سوراخ با یک قطعه چسب استریل بسته شده است.
تکنیک های فنی توصیف شده از عفونت تجربی جنین های مرغ تنها نیست، بلکه گزینه های مختلفی دارد.
برای عفونت، جنین 7 تا 12 روزه استفاده می شود. دو نوع از روش شناخته شده است.
گزینه اولآنها به همان شیوه ای مانند Amnion به صورت خصوصی آلوده می شوند، با تنها تفاوت که آنها یک سوزن حاد و در Oskopope را می گیرند، مشاهده حرکات سوزن باید یک شاخص سوزن در بدن باشد.
گزینه دومآنها به همان شیوه ای که به شیوه ای باز می شوند، آلوده می کنند: از طریق پنجره در پوسته بدن جنین را در پوسته سفت می کند. این مواد به مغز یا قسمت های خاصی از بدن معرفی می شود. با چنین روش های عفونت، درصد قابل توجهی از مرگ غیر اختصاصی جنین وجود دارد.
قبل از انکوباسیون بیشتر بر روی پوسته آلوده به هر روش جنین های مرغ، یک مداد ساده (گرافیت) از یک جنین آلوده و زمانی که، و در صورت لزوم، اطلاعات دیگر نوشته شده است. جنین های مرغ آلوده در یک ترموستات برای انکوباسیون بیشتر قرار می گیرند، که طی آن بازتولید ویروس ها ساخته شده و انباشت آنها در ساختارهای مربوطه رخ می دهد. دمای انکوباسیون جنین ها از 33 تا 38 درجه سانتیگراد متفاوت است، بسته به خواص ویروس، که باعث عفونت شد. برای جنین، نظارت مستمر وجود دارد، مرور بر روی اسکوکوپ، انتخاب کاهش یافته است.
مرگ جنین ها در 24 ساعت اول پس از عفونت اغلب به دلیل بازتولید قارچ ها، میکرو فلور باکتریایی، وارد جنین همراه با تلقیح یا آسیب در آلودگی شد. این مرگ غیر اختصاصی است. در تاریخ های بعد، جنین ها به عنوان یک نتیجه به عنوان یک قاعده، پرورش در جنین ویروس می میرند. پس از پیدا کردن جنین های مرده، آنها بلافاصله به یخچال و فریزر با دمای 4 درجه سانتیگراد منتقل می شوند. چنین شرایطی، از یک طرف، به حفظ فعالیت انباشته شده در جنین ویروس، از سوی دیگر، مهر و موم بافت ها و راه اندازی عروق، که به طور قابل توجهی کاهش کالبد شکافی را تسهیل می کند، کمک می کند.
جنین ها تا حداکثر انباشت ویروس انکوباتور می شوند. برای هر ویروس و حتی فشار، این دوره تعریف شده و از 2 تا 7-8 روز متفاوت است. بنابراین، برای ویروس بیماری نیوکاسل، فشار H، آن 2-3 روز است، برای همان ویروس فشار در، 5 روز، برای ویروس لارنژوتراسی عفونی پرندگان - 5 روز، و غیره سپس تمام جنین ها حداقل 3-4 ساعت با خنک شدن در دمای 4 درجه سانتیگراد کشته می شوند.
روش OZN حذف از جنین در تخم مرغ در دوره ای است که پوسته chorionallantical به طور کامل به پوسته آن از داخل مجاور است. اگر شما یک ماده مغذی را در داخل چنین تخم مرغ اضافه کنید، سپس یک فرهنگ عجیب و غریب بافتی که ویروس می تواند ضرب شود، ایجاد می کند. این روش دارای مزایای متعددی است: به شما این امکان را می دهد که یک ویروس پاک کننده را به دست آورید نسبت به مایع آلن-آمنیوتیک، که مهم است برای کاهش خواص آلرژیک واکسن های تهیه شده از این مواد مهم است؛ عدم وجود یک کیسه زرد و، بنابراین، آنتی بادی های خاص موجود در آن باعث می شود به بهتر ضرب برخی از ویروس ها. در برخی موارد، این روش نتایج خوبی در کار تشخیصی می دهد، زیرا حاوی مقادیر زیادی از مواد مورد مطالعه است که امکان تقسیم ویروس را افزایش می دهد.
این روش برنوپاپ را در سال 1949 پیشنهاد کرد، اما به دلیل مشکلات استفاده به طور گسترده ای مورد استفاده قرار نمی گیرد. این مشکلات با اموال پوسته کورونلاتیک در فرآیند انکوباسیون جدا شده از پوسته همراه است که ارزش فرهنگ را کاهش می دهد و باعث می شود که دریافت ویروس و جایگزینی رسانه های پیکربندی شود.
E. Groel (1963) تعدادی از تغییرات را معرفی کرد که این مشکلات را از بین می برد. او پیشنهاد کرد که از تخم مرغ های 15 روزه و حتی بزرگتر استفاده کند که در فرآیند انکوباسیون باید اغلب برای توسعه یکنواخت پوسته پوسته پوسته پوسته شود. هنگامی که شفاف، مرزهای اتاق هوا را نشان می دهد. پوسته های 0.5 سانتی متر بالاتر این خط ریخته، پارافین ذوب شده (56-58 درجه سانتی بازدید کنندگان) است به لبه پوسته پوسته (56-58 درجه سانتی بازدید کنندگان) است، که یخ زده، رفع لبه تخم مرغ ریخته می شود. سپس سوراخ دور در پوسته بیش از جنین، ترک در اطراف یک لبه باریک. مرحله بعدی حذف دقیق جنین از تخم مرغ است. در این مورد، تخم مرغ باید در موقعیت افقی برگزار شود و به آرامی چرخش یابد. به این ترتیب، عروق ها یافت می شوند، جنین را با HAA پیوند می دهند و آنها را با قیچی برش می دهند. اگر تخم مرغ حفظ شود، سپس جوانه ها پوسته را با جرم خود می کشد، معمولا آن را در ناحیه انتهای تیز تخم مرغ پاره می کند. حتی مقدار کمی مایع بین Hao و پوسته باعث می شود که یک قطعه پوسته کامل برای 1-2 روز باشد.
پس از حذف از جنین، پوسته، پوشش تخم مرغ، چندین بار با یک راه حل فیزیولوژیکی سرد به 4-0 ° C تکرار، تا زمانی که مایع شفاف می شود. سپس، 20 میلی لیتر از محیط مغذی به داخل حفره تخم مرغ، به 37 درجه سانتیگراد تبدیل شد و تخم مرغ پس از غوطه ور شدن آن به پارافین بسته شده است. یک لوله لاستیکی، نصب شده در یک تخم مرغ، هر دو مصرف و معرفی یک مایع بدون خطر آلودگی باکتریایی را فراهم می کند. چنین جسم بیولوژیکی ظرف چند روز حیاتی را حفظ می کند.
با توجه به روش Yoshino و دیگران، حفره تخم مرغ demubrinated با یک راه حل آگار در راه حل Henksa پر شده است. تخم مرغ های تلخ را از طریق لوله در کلاه آلوده کنید.
سوالات کنترل:
1. ساختار جنین مرغ.
2. استفاده از جنین های مرغ در ویروس شناسی چیست؟
3. ساختار جنین مرغ در حال توسعه چیست؟
جنین ها با استفاده از 8 تا 14 روز با استفاده از نوع ویروس، روش عفونت استفاده می شود. بازتولید در جنین مرغ در قسمت های مختلف جنین رخ می دهد. تبلیغات عفونت: بر روی پوسته کورونلاتیک، در کیسه های آلوتویک و آمنیوتیک، گوشتی، بدن جنین.
بسته به تکنیک آماده سازی 3 نوع سلول ها:
تک لایه می تواند بر روی سطح شیشه ای خنثی شیمیایی به شکل یکپارچه ضرب شود؛
تعلیق، شکسته من در کل حجم مواد مغذی؛
قطعات ارگان-یک قطعه از اندام ها و بافت هایی که ساختار اصلی را حفظ می کنند.
آماده سازی فرهنگ اولیه سلول ها از چند مرحله جدا شده است: سنگ زنی بافت، قطع سلول، شستشو تعلیق حاصل از تریپسین.
نشانه:
- تغییرات مورفولوژیکی مورفولوژیک سیتوپاتیک در زیر میکروسکوپ، تا رد شیشه ای.
اجزاء ویروسی هستند تجمع ذرات ویروسی و یا جداسازی اجزای ویروس در یک هسته، سیتوپلاسم و یا سلول.
مناطق محدود Balax متشکل از سلول های دژنراتیو. آنها به عنوان نقاط نور در پس زمینه سلول های رنگ شده قابل مشاهده هستند.
تست رنگ
همدردی - توانایی کشت سلولی به جذب بر روی سلول های قرمز سطح آن.
دخالت.
باکتریوفاژ های باکتری هایی که توانایی نفوذ به سلول های باکتریایی دارند، باعث انحلال آنها می شوند. آنها یک شکل از سرپوش ها، برخی از شکل های رشته ای مکعبی دارند. شامل فرآیند سر و دم Ikosahedral است. در داخل روند دم، میله استوانه ای، اجاق گاز، به پایان می رسد روند با یک بشقاب پایه شش ضلعی با سنبله های کوتاه است. فاژ شامل اسید نوکلئیک و پروتئین است. در فاژ های دارای یک شکل اسپرم، یک DNA دو نفره به شکل یک مارپیچ داخل سر بسته بندی شده است. پروتئین ها بخشی از پوسته هستند. علاوه بر پروتئین های ساختاری، پروتئین های داخلی مرتبط با اسید نوکلئیک و آنزیم های پروتئین های مربوط به تعامل فاژ با یک سلول است.
فاژ های ویروسی می توانند از طریق یک چرخه لیتری تنها مقدار را افزایش دهند. فرایند تعامل بین باکتریوفاژ های ویروسی با یک سلول از چندین مرحله تشکیل شده است: جذب باکتریوفاژ بر روی سلول، نفوذ به سلول، بیوسنتز اجزای فاژ و مونتاژ آنها، خروج از باکتریوفاژ ها از سلول.
در ابتدا باکتریوفاژ ها به گیرنده های فاگوسیفیک بر روی سطح سلول های باکتری متصل می شوند. دم از فاژ با کمک آنزیم ها در انتهای آن (به طور عمده لیزوزیم) به صورت محلی غشای سلولی را کاهش می دهد، آن را کاهش می دهد، آن را کاهش می دهد و در سلول DNA قرار می گیرد به سلول تزریق می شود، در حالی که پوسته پروتئین باکتریوفاژ خارج می شود. پردازش شده DNA باعث بازآرایی کامل از متابولیسم سلولی: سنتز DNA باکتری ها، RNA و پروتئین متوقف می شود. DNA از باکتریوفاژ شروع به رونویسی با استفاده از ترانس کریپتاز آنزیم خود را، که، پس از ورود به سلول باکتری، فعال می شود. در اوایل، و پس از آن IRNN، که بر روی ریبوزوم سلول میزبان قرار می گیرند، که در آن زودتر (DNA پلیمراز، نیتروژن) و پروتئین های اواخر (کادوگرافی و حفره، آنزیم های لیزوزیم، آنزیم های آتفاز و ترشح) سنتز می شوند. تکرار DNA باکتریوفاژ از طریق مکانیسم نیمه انحصاری رخ می دهد و با مشارکت DNA پلیمراز DNA خود انجام می شود. پس از سنتز پروتئین اواخر و تکمیل تکثیر DNA می آید روند نهایی - رسیدن ذرات فاژی یا اتصال DNA فاژ با پروتئین پوسته و تشکیل ذرات فاژی عفونی رسیده است.
همچنین ببینید:
|
بسیاری از ویروس های موثر بر انسان ها و حیوانات ممکن است عمدتا در جنین مرغ افزایش یابد. حضور پوسته متراکم جنین را از ورود به میکروارگانیسم ها از محیط خارجی محافظت می کند.
روش کشت ویروس ها در جنین های مرغ با تشخیص آزمایشگاهی عفونت های ویروسی و همچنین تولید واکسن های ویروسی و آماده سازی تشخیصی مورد استفاده قرار می گیرد. اما این روش دارای نقایص است: 1) غیرممکن است که در پویایی تغییرات پاتولوژیک در جنین پس از عفونت با ویروس مشاهده شود. 2) در باز شدن جنین آلوده به ویروس، اغلب تغییرات قابل مشاهده را شناسایی نمی کند و لازم است برای شناسایی حضور یک ویروس در بافت های جنینی، با استفاده از سایر روش های ویروسی (به عنوان مثال، واکنش هموگلوتینگ)؛ 3) روش کشت در جنین های مرغ برای همه ویروس ها مناسب نیست. با وجود کمبودهای موجود، این روش نسبتا ساده، راحت و ارزان است و به طور گسترده ای در مطالعات ویروسی استفاده می شود. این همان معنی را در هنگام کار با Olteriksovirus، Herpesviruses، Poksvirus دارد.
1.3.1 ساختار جنین مرغ
جنین مرغ با پوسته آهک پوشیده شده است - یک پوسته، که پوسته مجاور از داخل آن است. در انتهای ناپایدار تخم مرغ، آن را تقسیم می کند و فضای هوایی را شامل می شود. زیر پوسته پوسته است یک پوسته chorionallantic وجود دارد، در پایان بلانت از تخم مرغ، آن را به همراه در داخل پوسته پوسته عبور می کند، بسته شدن حریم هوایی، این پوسته غنی از رگهای خونی است و به عنوان جنین از بدن تنفسی عمل می کند. از درون، حفره allantomic مجاور به آن است، که ارگان انزوا و جنین از خشک شدن و صدمات محافظت می کند. حفره Allantomic جنین را در حفره آمنیون، که با مایع چرب پر شده است، احاطه کرده است. از طریق طناب گوشتی، جنین به کیسه یولک متصل می شود - منبع اصلی مواد مغذی.
برای کشت موفقیت آمیز ویروس ها در بدن جنین های مرغداری، درجه حرارت خاصی مورد نیاز است (36 0 -38 0)، رطوبت (50-70٪)، و همچنین تهویه مناسب. آنها جنین های مرغ از سن خاصی را آلوده می کنند که از 6 تا 13 روز بسته به نوع ویروس ها و روش عفونت انکوباتور شده اند. لازم است برای آماده سازی: پایه برای تخم مرغ، حباب با الکل و ید، لوله آزمایش با پارافین استریل، پوشش پنجره ها، پشمی استریل و گاز، پیچیده شده در کاغذ ظروف استریل، سرنگ استریل، سوزن، قیچی، سوزن vacuer. ابزار در یک فنجان با الکل، جایی که آنها در سراسر کار می قرار می گیرد، قبل از هر دستکاری، آنها علاوه بر این توسط سوزش در شعله سترون. دست قبل از کار به طور کامل شستشو، توصیه می شود برای پوشیدن ماسک از مارلی.
برای کار، جنین های زنده انتخاب می شوند، تخم مرغ های انکوباتور را در تخمدان شفاف می کنند. جنین زنده قابل حمل است، رگ های خونی پوسته با خون پر می شوند. تخم مرغ های انتخاب شده به دقت بر روی انتهای Blunt (یا در کنار تخم مرغ) به دقت ضد عفونی می شوند: پوسته با الکل پاک می شود، با استفاده از ید، با الکل و سوختگی درمان می شود.
1.3.2 عفونت جنین مرغ در پوسته Chorionallantic
برای عفونت، جنین های مرغ 8 تا 12 روزه استفاده می شود. مراحل اصلی عفونت:
1. تخم مرغ بر روی ایستاده در موقعیت عمودی قرار می گیرد تا کیسه هوا در بالای صفحه قرار گیرد، استریلیزاسیون پوسته را بر روی انتهای شکم تخم مرغ صرف کنید.
2. بالای مرکز کیسه هوا، سوراخ پوسته پوسته را با استفاده از سوزن آماده می کند.
3. در سوراخ حاصل، قیچی ها با یک شاخه تزریق می شوند و پنجره را در پوسته حدود 1.5 سانتی متر قطر برش می دهند.
4. از طریق سوراخ، با دقت سوزن ورق داخلی پوسته پوسته و پوست را بر روی یک بخش کوچک (0.5-1 سانتی متر) قرار دهید.
5. پوسته ChorionAlantic با 0.1-0.2 میلی لیتر مواد حاوی ویروس حاوی یکپارچه پپت یا یک سرنگ آلوده شده است.
6. پنجره در پوسته با یک فیلم مخصوص الاستیک یا شیشه ای پوشش استریل بسته شده و به پارافین مذاب متصل شده است.
جنین های آلوده در یک ترموستات در یک موقعیت عمودی قرار می گیرند و به مدت 2-3 روز انکوباتور می شوند، پس از آن یک کالبد شکافی بر اساس قوانین زیر ساخته می شود:
1. تخم مرغ روی پایه قرار می گیرد تا فضای هوایی در بالای صفحه قرار گیرد، محل باز شدن استریل شده است.
2. قیچی استریل توسط پوسته در امتداد مرز فضای هوایی کاهش می یابد.
3. با استفاده از موچین، پوسته را در مرز حذف کنید. پوسته کورینالاتیک برهنه در امتداد لبه پوسته بریده شده است. از طریق سوراخ حاصل، تمام محتویات تخم مرغ در یک فنجان یا سینی ریخته می شود.
4. پوسته ChorionAlantic باقی مانده در داخل پوسته با دقت توسط موچین ها به دقت برداشته می شود و در یک فنجان استریل با سالین قرار می گیرد. در اینجا نقاشی شده است و یاد می گیرد تغییر کند، قرار دادن یک فنجان در یک پس زمینه تاریک.
برای به دست آوردن یک ماده حاوی یک ویروس از پوسته ChorionAlantAlantic، لازم است آن را با قیچی خرد کنید و سپس به یک ملات با شیشه کوارتز بریزید و یک محلول شور را اضافه کنید. تعلیق حاصل شده در سال 2000 RPM به مدت 10-15 دقیقه سانتریفیوژ شده است و سوپرناتانت به عنوان یک ماده حاوی ویروس استفاده می شود.
شکل. 3. عفونت جنین های مرغ
1.3.3. آلونتو حفره عفونت
برای عفونت جنین های 10-11 روزگی را می گیرند. مراحل اصلی عفونت:
1. تخم مرغ بر روی پایه قرار می گیرد و به پایان می رسد و آن را به استریلیزاسیون پوسته بالای فضای هوایی منتقل می کند.
2. در مرکز پایان احمق، سوراخ کردن پوسته را با استفاده از سوزن آماده کنید.
3. سوراخ به سوزن یک سرنگ حاوی پرورش ویروس معرفی می شود. سوزن در یک جهت عمودی 2-3 میلی متر زیر سطح کیسه هوا و سپس 0.1-0.2 میلی لیتر مواد تجویز می شود.
4. سوراخ در پوسته با پارافین استریل مذاب مهر و موم شده است.
جنین های آلوده در عرض 2 روز در یک ترموستات مقاومت می کنند. قبل از باز کردن تخم ها در شب در یخچال و فریزر در 4 0 درجه سانتیگراد قرار می گیرند. باز شدن در سفارش زیر انجام می شود:
1. تخم مرغ بر روی پایه نصب شده است، به طوری که کیسه هوا در بالای صفحه است، آنها بر روی آن استریل شده است.
2. با استفاده از قیچی، پوسته کمی بالاتر از مرز فضای هوایی کاهش می یابد.
3. با دقت حذف پوسته پوسته با موچین، و پس از آن پوسته chorionallantic با یک پیپت تجزیه کننده در محل که در آن هیچ عروق وجود دارد سوراخ شده، و مایع allantomic suused است.
4. مایع آلونتومیک به یک لوله آزمایش استریل منتقل می شود و این قسمت برای بررسی استحکام باکتریولوژیک به سوپ بذر می شود.
