การติดเชื้อของเยื่อหุ้ม chorioallantoicวิธีนี้เป็นวิธีหนึ่งที่ใช้บ่อยที่สุด ข้อได้เปรียบหลักของมันคือไวรัสจำนวนหนึ่งเมื่อเพิ่มจำนวนบนเยื่อหุ้มเซลล์ chorioallantoic จะทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงลักษณะโดยก่อให้เกิดรอยโรคในรูปแบบของแผ่นจุดสีขาวที่มีสัณฐานวิทยาต่างๆ
ตัวอ่อนอายุ 10-12 วันใช้สำหรับการติดเชื้อ โดยปกติแล้ว เยื่อหุ้มเซลล์ chorioallantoic จะถูกเจาะโดยการเจาะรูในเปลือกเหนือถุงลมหรือที่ด้านข้างของไข่
ขั้นตอนหลักของการติดเชื้อบนเยื่อหุ้ม chorioallantoic จากช่องอากาศ:
1. วางไข่ไว้บนขาตั้งในแนวตั้ง
โดยให้ถุงลมนิรภัยอยู่ด้านบน)" ดำเนินการ
การฆ่าเชื้อบริเวณเปลือกไข่ที่ปลายทู่อย่างทั่วถึง
2. เปลือกถูกเจาะเหนือศูนย์กลางของถุงลม
โดยใช้เข็มผ่า
3. ใส่กรามของกรรไกรเข้าไปในรูที่เกิดและ
ตัดหน้าต่างในเปลือกเส้นผ่านศูนย์กลางประมาณ 1.5 ซม. (ในขณะเดียวกัน
อย่าให้เศษเปลือกเข้าไปในไข่)
4. เมื่อผ่านรูที่ทำไว้จะมองเห็นใบด้านในได้
เยื่อหุ้มเปลือกก็ถูกฉีกขาดอย่างระมัดระวังด้วยตา
แหนบหรือเข็มแล้วลอกออกในบริเวณเล็กๆ (0.5-1
ซม. 2) เผยให้เห็นเยื่อหุ้ม chorioallantoic
5. ติดเชื้อเยื่อหุ้ม chorioallantoic
โดยทาสารที่มีไวรัสในปริมาณ 0.1-0.2 มิลลิลิตร
(เช่น ไวรัสวัคซีน) โดยใช้ปิเปตของปาสเตอร์
หรือเข็มฉีดยา
6. หน้าต่างในเปลือกปิดด้วยยางยืดพิเศษ
ฟิล์ม แผ่นปิดหมัน หรือแก้ว
หมวก สำหรับติดกระจกและฝาเข้ากับเปลือกหอย
ใช้พาราฟินหลอมเหลว
ตัวอ่อนที่ติดเชื้อจะถูกวางไว้ในเทอร์โมสตัทในตำแหน่งแนวตั้งและฟักเป็นเวลา 2-3 วัน หลังจากนั้นจึงทำการชันสูตรพลิกศพตามกฎต่อไปนี้:
1. วางไข่ไว้บนขาตั้งเพื่อให้อากาศถ่ายเท
พื้นที่อยู่ด้านบน สถานที่กำลังถูกฆ่าเชื้อ
การเปิดที่กำลังจะเกิดขึ้นโดยการประมวลผลที่เหมาะสม
แอลกอฮอล์และไอโอดีน
2. หลังจากลอกฟิล์ม แผ่นปิด หรือฝาปิดออกแล้ว
ใช้กรรไกรปลอดเชื้อตัดเปลือกออกตามแนวขอบอากาศ
ช่องว่าง.
3. ใช้แหนบดึงเปลือกออก
เยื่อหุ้มเซลล์ chorioallantoic ที่ถูกเปิดเผย (ซึ่งอาจ
ให้เห็นการเปลี่ยนแปลง) ตัดแต่งตามขอบเปลือก ผ่าน
หลุมที่เกิดขึ้นเทเนื้อหาทั้งหมดของไข่ลงในถ้วย
หรือถาด
4. เนื้อเยื่อ chorioallantoic ที่เหลืออยู่ภายในเปลือก
เปลือกจะถูกเอาออกอย่างระมัดระวังด้วยแหนบแล้วใส่เข้าไป
ถ้วยฆ่าเชื้อด้วยน้ำเกลือ นี่มันคือ
ยืดตัวและศึกษาการเปลี่ยนแปลงโดยวางถ้วยไว้บนที่มืด
พื้นหลัง
เพื่อให้ได้วัสดุที่มีไวรัสจากเมมเบรน chorioallantoic จะต้องบดด้วยกรรไกรแล้วบดในครกด้วยแก้วควอทซ์ โดยเติม น้ำเกลือ- ระบบกันสะเทือนที่เกิดขึ้นจะถูกปั่นเหวี่ยงที่ 2,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10-15 นาที และใช้ส่วนเหนือตะกอน! เป็นวัสดุที่มีไวรัส (จำเป็นต้องมีการทดสอบภาคบังคับว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย)
การติดเชื้อในช่องอัลลันโทอิกวิธีการนี้
โดดเด่นด้วยความเรียบง่ายและมีคุณค่าเนื่องจากมีส่วนช่วยในการสะสมของไวรัสอย่างมีนัยสำคัญ โดยปกติตัวอ่อนอายุ 10 วันจะถูกนำไปติดเชื้อ ขั้นตอนหลักของการติดเชื้อในโพรงอัลลันโทอิก:
}. วางไข่ไว้บนขาตั้งโดยให้ปลายทู่หงายขึ้น และเปลือกไข่จะถูกฆ่าเชื้อเหนือช่องอากาศ
2. ที่กึ่งกลางของปลายทื่อจะมีการเจาะเข้าไปในเปลือกด้วย
โดยใช้เข็มผ่า
3. สอดเข็มของกระบอกฉีดยาที่มีสารเจือจางเข้าไปในรู
ไวรัส (เช่นไวรัสไข้หวัดใหญ่) เข็มกำลังก้าวเข้าสู่
ทิศทางแนวตั้งต่ำกว่าระดับอากาศ 2-3 มม
ถุงแล้วฉีดสาร OD-0.2 มล.
4. รูในเปลือกถูกปิดผนึกโดยใช้
พาราฟินหมันละลาย
โดยปกติตัวอ่อนที่ติดเชื้อจะถูกเก็บไว้ในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 2 วัน ก่อนเปิดไข่ ให้นำไข่ไปแช่ในตู้เย็นข้ามคืนที่อุณหภูมิ 4° การเปิดจะดำเนินการตามลำดับต่อไปนี้:
1. วางไข่บนขาตั้งโดยให้ถุงลมนิรภัยอยู่ด้านบน เปลือกด้านบนจะถูกฆ่าเชื้อ
2. ใช้กรรไกรตัดเปลือกให้สูงขึ้นเล็กน้อย
ขอบเขตน่านฟ้า
3. ค่อยๆ แกะเปลือกออกด้วยแหนบแล้ว
เหตุใดเมมเบรน chorioallantoic จึงถูกเจาะด้วยปาสเตอร์
ปิเปตในสถานที่ที่ไม่มีภาชนะและดูดอัลลันโทอิก
ของเหลว (คุณสามารถเก็บได้ 5-6 มล.)
4. ของเหลว Allantoic จะถูกถ่ายโอนไปยังที่ปลอดเชื้อ
หลอดทดลองและบางส่วนถูกฉีดเข้าไปในน้ำซุปเพื่อตรวจสอบ
ความปลอดเชื้อทางแบคทีเรีย
วิธีการติดเชื้อโพรงอัลลันโทอิกมักใช้ในการปลูกฝังไวรัสไข้หวัดใหญ่ เช่นเดียวกับคางทูมและวัคซีน
การติดเชื้อในช่องน้ำคร่ำ
วิธีนี้ทำได้ยากกว่าและใช้บ่อยน้อยกว่าวิธีก่อนหน้าเล็กน้อย ลักษณะเฉพาะของมันคือเมื่อติดเชื้อไวรัส pneumotropic บางชนิด (เช่นไวรัสไข้หวัดใหญ่, คางทูม) ตัวหลังจะทวีคูณไม่เพียง แต่ในเซลล์ของเยื่อหุ้มน้ำคร่ำเท่านั้น แต่ยังอยู่ในทางเดินหายใจและเนื้อเยื่อปอดของตัวอ่อนด้วยซึ่งของเหลวที่ติดเชื้อ แทรกซึม ตัวอ่อนอายุ 7-12 วันใช้สำหรับการติดเชื้อ การติดเชื้อในโพรงน้ำคร่ำจะดำเนินการโดยใช้วิธีเปิด โดยการนำวัสดุเข้าไปในเปลือกได้ค่อนข้างน้อย หลุมใหญ่หรือโดยวิธีปิดเมื่อติดเชื้อผ่านการเจาะเปลือก
ครั้งแรกมีบาดแผลมากกว่าส่วนที่สองมีความน่าเชื่อถือน้อยกว่าเนื่องจากการสุ่มสี่สุ่มห้าจึงไม่สามารถสอดเข็มเข้าไปในโพรงน้ำคร่ำได้เสมอไป
เทคนิคการติดเชื้อแบบเปิด:
1. วางไข่บนขาตั้งและฆ่าเชื้อ
เปลือกบริเวณปลายทู่
2. เหนือศูนย์กลางน่านฟ้าในเปลือก
ใช้กรรไกรตัดหน้าต่างที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 2 ซม. (เช่น
สำหรับการติดเชื้อที่เยื่อหุ้ม chorioallantoic)
3. นำใบด้านในของเปลือกออกอย่างระมัดระวัง
เมมเบรนโดยใช้แหนบเผยให้เห็นส่วนที่อยู่ข้างใต้
เยื่อหุ้มเซลล์ chorioallantoic
ใช้กรรไกรตัดรูเล็กๆ เข้าไป
เยื่อหุ้มเซลล์ chorioallantoic ในบริเวณที่ไม่มี หลอดเลือดและสอดแหนบตาเข้าไปในรอยตัด เยื่อหุ้มน้ำคร่ำจะถูกจับด้วยแหนบ และถุงน้ำคร่ำจะถูกดึงออกมาเหนือพื้นผิวของเยื่อหุ้มเซลล์ chorioallantoic
5. จับเยื่อหุ้มน้ำคร่ำในตำแหน่งนี้
ติดเชื้อในช่องน้ำคร่ำโดยการฉีด 0.1-
เจือจางไวรัส 0.2 มล.
6. ปิดรูในเปลือกด้วยฝาปลอดเชื้อ
หรือครอบกระจกเพื่อใช้ซ่อมและ
ปิดผนึกไข่ด้วยพาราฟินหลอมเหลว
ตัวอ่อนที่ติดเชื้อจะถูกฟักเป็นเวลา 2 วัน ส่วนเซลล์ที่ตายแล้วจะถูกทิ้งไปในวันแรก (สังเกตผ่านหน้าต่างในเปลือก) หลังจากเปิดแล้ว ตัวอ่อนจะถูกเก็บไว้ค้างคืนในตู้เย็นที่อุณหภูมิ 4°C
เทคนิคการเปิดตัวอ่อนขณะติดเชื้อในช่องน้ำคร่ำ:
1. หลังจากฆ่าเชื้อบริเวณที่จะชันสูตรพลิกศพที่กำลังจะเกิดขึ้นแล้ว ให้ตัดออก
เปลือกอยู่เหนือขอบถุงลมเล็กน้อย
2. เยื่อหุ้มเซลล์ chorioallantoic ถูกเจาะ
ปิเปตปาสเตอร์และเอาของเหลวอัลลันโทอิกออก
3. ใช้แหนบคีบถุงน้ำคร่ำ
เมมเบรนด้วยเข็มฉีดยาหรือปิเปตปาสเตอร์และ
ดูดของเหลวลบความจำเข้าไป (จาก 0.5 ถึง 1.5 มล.) คุณ
ตัวอ่อนที่ติดเชื้อ ของเหลวควรมีขุ่นในขณะเดียวกัน
มีลักษณะโปร่งใสเหมือนตัวอ่อนปกติ
4. ของเหลวที่ถ่ายจะถูกถ่ายโอนไปยังหลอดทดลองที่ปราศจากเชื้อ 0.1-
เติมเชื้อ 0.3 มิลลิลิตรลงในน้ำซุปเพื่อควบคุมแบคทีเรีย
ความเป็นหมัน
การแยกไวรัสในสัตว์ทดลอง
การเลือกสัตว์ทดลองขึ้นอยู่กับชนิดของไวรัส สัตว์ทดลองถือเป็นแบบจำลองทางชีววิทยา บางครั้งจำเป็นต้องดำเนินการ "ตาบอด" โดยไม่มีอาการ 3-5 ครั้งก่อนที่จะสามารถปรับไวรัสให้เข้ากับ สภาพห้องปฏิบัติการ- อย่างไรก็ตาม สัตว์ทดลองไม่ไวต่อไวรัสบางชนิด ซึ่งในกรณีนี้จำเป็นต้องใช้สัตว์ที่ไวต่อไวรัสตามธรรมชาติ ตัวอย่างเช่นมีไข้สุกรและโรคโลหิตจางจากการติดเชื้อในม้า
วัตถุประสงค์ของการติดเชื้อในสัตว์ทดลอง:
1. ศึกษาการเกิดโรค
2. แยกไวรัสออกจากวัสดุที่ทำให้เกิดโรค
3. การผลิตเซรั่มภูมิคุ้มกันและภูมิต้านทานเกิน
4. การผลิตวัคซีน
5. การบำรุงรักษาไวรัสในสภาพห้องปฏิบัติการ
6. การไทเทรตเพื่อกำหนดปริมาณไวรัสต่อหน่วยปริมาตร
7. แบบจำลองทางชีวภาพสำหรับการแสดงปฏิกิริยาการวางตัวเป็นกลาง
การเลือกวิธีการแพร่เชื้อในสัตว์ทดลองขึ้นอยู่กับเขตร้อนของไวรัส ดังนั้นเมื่อปลูกฝังไวรัสนิวโรโทรปิก สัตว์จึงติดเชื้อเข้าสู่สมอง ระบบทางเดินหายใจ intranasally, intratracheally; Dermatropic - ใต้ผิวหนังและในผิวหนัง
การติดเชื้อจะดำเนินการตามกฎของภาวะปลอดเชื้อและน้ำยาฆ่าเชื้อ
มีหลายวิธีในการนำสารที่มีไวรัสเข้าสู่ร่างกายของสัตว์:
ใต้ผิวหนัง; - สมอง; - ในผิวหนัง;
เยื่อบุช่องท้อง; - กล้ามเนื้อ; - ลูกตา;
ทางหลอดเลือดดำ; - ในจมูก; - โภชนาการ;
หลังการติดเชื้อ สัตว์จะถูกทำเครื่องหมาย วางในกล่องแยก และเฝ้าติดตามเป็นเวลา 10 วัน การตายของสัตว์ในวันแรกหลังการติดเชื้อถือว่าไม่เฉพาะเจาะจงและจะไม่นำมาพิจารณาในภายหลัง
3 สัญญาณบ่งบอกถึงประสิทธิภาพของการติดเชื้อ:
การปรากฏตัวของอาการทางคลินิก
ความตายของสัตว์
การเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยา (ขนาด รูปร่าง สี และความสม่ำเสมอของอวัยวะ)
เอ็มบริโอไก่คือไข่ไก่ที่ได้รับการปฏิสนธิซึ่งเอ็มบริโอ (เอ็มบริโอ) พัฒนาขึ้น การเพาะเลี้ยงไวรัสในตัวอ่อนไก่และนกกระทาได้กลายเป็นที่แพร่หลายเมื่อเร็ว ๆ นี้โดยเป็นหนึ่งในวิธีที่ง่ายและน่าเชื่อถือที่สุดในการเพาะและวินิจฉัยไวรัสและแบคทีเรียบางชนิด - Brucella, Rickettsia, Vibrio
ไวรัสของมนุษย์และสัตว์สามารถเพาะเลี้ยงได้ในการพัฒนาเอ็มบริโอไก่ เนื้อเยื่อของตัวอ่อน โดยเฉพาะเยื่อหุ้มของเอ็มบริโอซึ่งอุดมไปด้วยเนื้อเยื่อเยื่อบุผิวที่เป็นเชื้อโรค เป็นสภาพแวดล้อมที่เอื้ออำนวยต่อการแพร่กระจายของไวรัสหลายชนิด ไวรัสที่มีคุณสมบัติ epitheliotropic (ไข้ทรพิษ, ILT ฯลฯ ) พัฒนาได้สำเร็จบนเยื่อหุ้มเซลล์ chorioallantoic ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงที่มองเห็นได้ด้วยตาเปล่า ตัวแทนต่างๆ ของ myxoviruses (ไข้หวัดใหญ่, โรคนิวคาสเซิล, โรคไข้หัดสุนัข ฯลฯ ), ไวรัสหลอดลมอักเสบติดเชื้อ, ไวรัสตับอักเสบลูกเป็ด, arboviruses ฯลฯ สืบพันธุ์ได้ดีในตัวอ่อนเมื่อนำวัสดุเข้าไปในโพรงอัลลันโทอิก ไวรัสบางชนิดสามารถเพาะเลี้ยงในถุงไข่แดงได้สำเร็จ
ข้อดี:
1. ทำกำไรได้อย่างประหยัด นอกจากนี้ยังหาไข่ได้ง่าย
2. การพัฒนาเอ็มบริโอไก่ขาดกลไกในการป้องกันเพราะว่า ระบบภูมิคุ้มกันยังไม่พัฒนา
3. เปลือกไข่ป้องกันแบคทีเรียและไวรัสจากสิ่งแวดล้อมไม่ให้ทะลุผ่านได้
ในการเพาะเลี้ยงและแยกไวรัสออกจากเอ็มบริโอของไก่ จำเป็นต้องใช้อุปกรณ์ง่ายๆ เช่น เทอร์โมสตัทหรือตู้ฟักแบบปกติ
เงื่อนไข:
1. ไข่ได้มาจากฟาร์มที่ปลอดภัย โรคติดเชื้อ;
2. จะดีกว่าถ้าได้เอ็มบริโอไก่จากไก่พันธุ์ขาว (Leghorn, Russian White) เพราะพวกมันทนทานต่อการยักยอกมากกว่าและไม่ตายจากอาการบาดเจ็บเล็กน้อย นอกจากนี้เปลือกของพวกมันยังมีสีขาวและโปร่งใสกว่าสายพันธุ์อื่น และมองเห็นได้ง่ายกว่า ซึ่งสะดวกในการดูและสังเกตขณะทำงานกับพวกมัน
3. สำหรับการฟักไข่จะเลือกไข่ที่ปฏิสนธิวางไม่เกิน 10 วันก่อน
4. พวกเขาใช้ไข่ที่ไม่ปนเปื้อน เนื่องจากไม่สามารถล้างก่อนฟักไข่ได้ และไข่สกปรกจะมองเห็นได้น้อยลงเมื่อดู (ovoscopy) และเมื่อทำงานกับพวกมัน เอ็มบริโออาจติดเชื้อได้ในระหว่างกระบวนการจัดการ
ไข่จะถูกฟักในตู้ฟักหรือในเทอร์โมสตัทที่มีเครื่องทำน้ำร้อนและอากาศเข้า และในระหว่างการฟักไข่ในเทอร์โมสตัทนั้น จะต้องกลับไข่วันละ 2-3 ครั้ง และเพื่อการแลกเปลี่ยนก๊าซที่ดีขึ้น ให้นำออกมาเป็นเวลา 5-10 นาทีขึ้นไปในอากาศ เพื่อรักษาความชื้นไว้ ให้วางภาชนะที่มีน้ำไว้ในเทอร์โมสตัทเพื่อการระเหย โดยอุณหภูมิในเทอร์โมสตัทควรอยู่ที่ 38°
การพัฒนาของตัวอ่อนเกิดขึ้นแล้วในวันแรกของการฟักตัว การวางสมองและโครงกระดูกเกิดขึ้น โครงสร้างของตัวอ่อนไก่เมื่ออายุ 7-9 วัน(ดูสมุดบันทึก)
สำหรับการติดเชื้อมักใช้ตัวอ่อนอายุ 7-12 วันเป็นส่วนใหญ่ การทำงานกับเอ็มบริโอไก่จะดำเนินการในกล่องห้องปลอดเชื้อโดยยึดถือปลอดเชื้ออย่างเข้มงวดที่สุด
วัตถุประสงค์ของการติดเชื้อเอ็มบริโอไก่คือ:
1. แยกซับออกจากวัสดุสิทธิบัตร
2. การผลิตวัคซีน
3. การดูแลรักษาไวรัสในห้องปฏิบัติการ
4. การไตเตรทของไวรัส
5. แบบจำลองทางชีวภาพสำหรับการแสดงปฏิกิริยาการวางตัวเป็นกลาง
6. การศึกษาการแทรกแซงของไวรัสและการผลิตอินเตอร์เฟอรอน การติดเชื้อของตัวอ่อนไก่:
สำหรับการติดเชื้อ จะต้องเลือกตัวอ่อนที่มีชีวิตและมีความสามารถในการเคลื่อนไหวที่ชัดเจน ก่อนการติดเชื้อ ตัวอ่อนทั้งหมดจะได้รับการตรวจอย่างระมัดระวังในห้องมืดโดยใช้เครื่องตรวจไข่
ในระหว่างการปักเทียนตัวอ่อนก่อนการติดเชื้อ ปูกา (ช่องอากาศ) เส้นทางของหลอดเลือดขนาดใหญ่และตำแหน่งที่ปรากฏของตัวอ่อนจะถูกร่างไว้บนเปลือกด้วยดินสอง่ายๆ เช่น บริเวณบนเปลือกที่ตัวอ่อนอยู่ใกล้ที่สุด มัน. เครื่องหมายของปั๊ก ตำแหน่งที่ปรากฏของเอ็มบริโอ และเส้นทางของหลอดเลือดขนาดใหญ่ จะทำหน้าที่เป็นแนวทางในการเลือกตำแหน่งที่จะแนะนำวัสดุที่มีไวรัสในขณะที่ติดเชื้อ
เอ็มบริโอไก่ที่ได้รับการคัดเลือกสำหรับการติดเชื้อจะถูกถ่ายโอนไปยังกล่องเพื่อนำไปเพาะเลี้ยง ก่อนการติดเชื้อ เปลือกตรงบริเวณที่นำวัสดุจะได้รับการบำบัดด้วยแอลกอฮอล์เสริมไอโอดีนสองครั้งแล้วเผา ปริมาณการติดเชื้อคือ 0.1-0.2 ซม.
ขึ้นอยู่กับชนิดของไวรัสและวัตถุประสงค์ของการติดเชื้อจะแตกต่างกันไป วิธีการแนะนำวัสดุที่มีไวรัส:
1) การติดเชื้อของเยื่อหุ้ม chorioallantoic , ตัวอ่อนอายุ 7-12 วันใช้สำหรับการแยกและการเพาะเลี้ยงไวรัส neurotropic, dermatropic และ pantropic บางชนิด (ไข้ทรพิษ, ไข้สมองอักเสบ, ILT, โรคปากและเท้าเปื่อย, โรคพิษสุนัขบ้า, โรคระบาด ฯลฯ ) มี 3 ตัวเลือกการติดเชื้อ:
ก) เปิดปูกาแล้วตัดออกด้วยกรรไกร แยกเมมเบรนชั้นใต้ผิวออก และทาวัสดุบนเมมเบรน chorioallantoic (CAO) จากนั้นปิดรูในไข่ด้วยฝาแก้วปลอดเชื้อ และขอบของฝาจะแว็กซ์
b) ตัดสามเหลี่ยมที่มีความยาวด้านประมาณ 1 ซม. ในเปลือกออกด้วยตะไบเข็ม (ตะไบ) หรือมีดผ่าตัดแบบหยักที่ขอบของบูชาที่ด้านข้างของการนำเสนอของตัวอ่อน เอาส่วนของเปลือกออกและ เมมเบรนดาวฤกษ์ด้วยแหนบและแนะนำวัสดุ รูถูกปิดด้วยกระจกครอบที่ผ่านการฆ่าเชื้อ และขอบถูกพาราฟินหรือปิดผนึกด้วยเทปกาวฆ่าเชื้อ
c) ลบออกด้วยมีดผ่าตัด พื้นที่ขนาดเล็กเปลือกที่มีพื้นที่ประมาณ 0.5 ซม. ณ บริเวณที่มีตัวอ่อน จากนั้นจึงนำเยื่อหุ้มชั้นนอกออกในบริเวณนี้โดยใช้แหนบหรือเข็มแล้วฉีดวัสดุเข้าไป หากวัสดุไม่พอดีกับโพรงของไข่ คุณสามารถใช้กระเปาะยางเพื่อสูบลมออกจากไข่ผ่านรูในเปลือกบนไข่ และเป็นผลให้ไข่เทียมเกิดขึ้นที่ สถานที่ที่นำวัสดุเข้ามาแล้วจึงใส่วัสดุได้ง่าย รูในเปลือกถูกปิดด้วยปูนปลาสเตอร์หรือแว็กซ์
2) การติดเชื้อในช่องอัลลันโทอิก วิธีการติดไวรัสนี้ง่ายมาก และใช้เพื่อแยกไวรัสหลายชนิด สำหรับการติดเชื้อ จะใช้ตัวอ่อนอายุ 10-11 วัน มีสองตัวเลือกในการติดเชื้อ:
ก) การติดเชื้อเกิดขึ้นผ่านทาง puga โดยไม่ต้องตัดออก ใช้เข็มวัดระยะห่างจากด้านบนของ puga ถึงขอบของ puga โดยใช้ดินสอทำเครื่องหมายไว้ที่เปลือก แล้วสอดเข็มไปที่ความลึกที่ทำเครื่องหมายไว้และลึกลงไปอีก 0.5 ซม. เพื่อเจาะเยื่อหุ้ม chorioallantoic
b) วัสดุถูกสอดด้วยเข็มผ่านการเจาะเข้าไปในเปลือก ณ ตำแหน่งที่มีการนำเสนอตัวอ่อนจนถึงระดับความลึก 3-5 มม. ในบริเวณที่มีหลอดเลือด รูในเปลือกถูกปิดด้วยปูนปลาสเตอร์หรือแว็กซ์
3) การติดเชื้อในถุงไข่แดง ตัวอ่อนอายุ 5-8 วันใช้สำหรับการติดเชื้อ มีสองตัวเลือกในการติดเชื้อ:
ก) สอดเข็มจากด้านข้างของบูชาเข้าไปในถุงไข่แดงโดยทำมุม 45° ไปยังตำแหน่งที่ปรากฏของตัวอ่อนภายใต้การควบคุมของกล้องตรวจไข่
b) วางไข่บนขาตั้งโดยให้ตัวอ่อนชี้ลง และสอดเข็มจากบนลงล่างเข้าหาตัวอ่อนจนถึงระดับความลึกประมาณ 1 ซม.
บริเวณที่ฉีดถูกปิดผนึกด้วยเทปกาวและพาราฟิน 4) การติดเชื้อในช่องน้ำคร่ำด้วยวิธีการติดเชื้อนี้ ไวรัสสามารถแทรกซึมและเพิ่มจำนวนในเซลล์ต่างๆ ที่สัมผัสกับน้ำคร่ำได้ เพื่อความสะดวกในการติดเชื้อ แนะนำให้ฟักตัวอ่อน 2-3 วันก่อนติดเชื้อโดยหงายหน้าขึ้น จากนั้นเอ็มบริโอและน้ำคร่ำจะเคลื่อนตัวขึ้นด้านบนและติดเชื้อได้สะดวกยิ่งขึ้น มีสองตัวเลือกในการติดเชื้อ:
ก) เปิดและตัด puga ออก ใช้แหนบเอาเยื่อหุ้มชั้นนอกออกแล้วหยิบน้ำคร่ำ ดึงน้ำคร่ำด้วยแหนบแล้วนำวัสดุในขนาด 0.1 มล. เข้าไปในช่องน้ำคร่ำ จากนั้นปิดรูในเปลือกด้วยฝาแก้วปลอดเชื้อและขอบด้วยแว็กซ์
b) การติดเชื้อโดยใช้เข็มยาวผ่าน puga ในห้องมืดภายใต้การควบคุมสายตา ขั้นแรกให้งอปลายเข็มเป็นมุมฉากเพื่อสร้างพื้นที่ขนาดเล็ก เข็มจะถูกสอดเข้าไปภายใต้การควบคุมของดวงตาผ่านทางส่วนที่ยื่นออกมาของตัวอ่อนระยะก่อนตัวอ่อน ในกรณีนี้ ภายใต้แรงกดของเข็มทื่อ ตัวอ่อนจะเคลื่อนที่ จากนั้นน้ำคร่ำจะถูกเจาะด้วยการกดเล็กน้อย และเข็มจะขยับเล็กน้อย ดึงกลับ ในกรณีนี้ ตัวอ่อนควรขยับขึ้นไปด้านหลังเข็ม จากนั้นจึงแนะนำวัสดุ
5) การติดเชื้อเข้าสู่ร่างกายของเอ็มบริโอและการติดเชื้อเข้าสู่สมอง ใช้ตัวอ่อนอายุ 7-12 วัน การติดเชื้อทำได้โดยการนำวัสดุเข้าสู่ส่วนต่างๆ ของร่างกาย หรือเข้าสู่สมองโดยตรง สำหรับการติดเชื้อ พูกาจะเปิดออกและดึงตัวอ่อนออกด้วยแหนบ ด้วยวิธีการติดเชื้อเหล่านี้ ตัวอ่อนที่ติดเชื้อมากถึง 30% หรือมากกว่าอาจเสียชีวิตจากการบาดเจ็บ
6) การติดเชื้อในหลอดเลือดขนาดใหญ่ของเยื่อหุ้ม chorioallantoic วิธีการติดเชื้อนี้เหมือนกับวิธีก่อนหน้านั้นใช้น้อยมาก วัสดุจะถูกฉีดด้วยเข็มบางๆ หลังจากเอาเปลือกตามหลอดเลือดออกโดยตรงเข้าไปในหลอดเลือดตามการไหลเวียนของเลือด
หลังการติดเชื้อ จะต้องทำเครื่องหมายตัวอ่อนไก่ด้วยดินสอง่ายๆ และวางไว้ในเทอร์โมสตัท มีการตรวจติดตามทุกวันโดยการชม โดยจะสังเกตได้นานถึง 7-8 วัน ขึ้นอยู่กับชนิดของไวรัส หากตัวอ่อนตาย พวกมันจะถูกเอาออกจากเทอร์โมสตัททันทีและนำไปแช่ในตู้เย็นจนกระทั่งเปิด หากเอ็มบริโอเสียชีวิตภายใน 14-18 ชั่วโมงแรก อาจเกิดจากการบาดเจ็บหรือความเป็นพิษของสารทางพยาธิวิทยา ดังนั้น เช่นเดียวกับเมื่อแพร่เชื้อในสัตว์ทดลอง ในกรณีที่มีข้อสงสัย แนะนำให้ทำหลายช่องและนำตัวอ่อนหลายตัวสำหรับแต่ละวัสดุ
การชันสูตรพลิกศพไก่ที่ติดเชื้อที่ตายหรือเอาออกหลังจากพ้นระยะเวลาสังเกตแล้ว จะดำเนินการตามกฎของอาเซพซิสทุกประการในสภาพชกมวยปลอดเชื้อ เมื่อเปิดเปลือกออก เปลือกจะถูกชุบแอลกอฮอล์แล้วเผา จากนั้นจึงตัดพุก้าออก จากตัวอ่อนที่เปิดอยู่น้ำอัลลันโทอิกจะถูกดูดออกอย่างระมัดระวังในขั้นแรก (ปริมาณประมาณ 7 มล.) จากนั้นเยื่อหุ้มน้ำคร่ำจะถูกดึงกลับด้วยแหนบเจาะด้วยปิเปตของปาสเตอร์และน้ำคร่ำจะถูกดูดออก (จำนวน 1.0- 1.5 มล.) จากนั้นเก็บไข่แดง เยื่อหุ้มเซลล์และตัวอ่อนจะถูกเอาออก มีการตรวจสอบของเหลว เยื่อหุ้มเซลล์ และตัวอ่อนอย่างระมัดระวังเพื่อดูการเปลี่ยนแปลง น้ำคร่ำโดยปกติจะใสสะอาด แต่เมื่อติดเชื้อแล้ว อาจมีสีขุ่นและมีเลือดปนได้ การเปลี่ยนแปลงลักษณะที่เกิดจากไวรัสนั้นเด่นชัดที่สุดในเยื่อหุ้มเซลล์ chorioallantoic: จุดโฟกัสการอักเสบปรากฏขึ้น, ทึบแสง, ทรงกลมและอาการตกเลือด อาการตกเลือดอาจเกิดขึ้นบนร่างกายของตัวอ่อน วัสดุทั้งหมดจะถูกรวบรวมในภาชนะที่ปลอดเชื้อ
เอ็มบริโอไก่ในด้านไวรัสวิทยาถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายไม่เพียงแต่สำหรับการแยกไวรัสเท่านั้น แต่ยังสำหรับการสะสมและรับแอนติเจน เพื่อเตรียมวัคซีนที่มีชีวิตและฆ่าแล้ว การไตเตรทไวรัส สำหรับการแสดงปฏิกิริยาการวางตัวเป็นกลางของไวรัส เพื่อลดไวรัส (ทำให้อ่อนแอลง) ไวรัส เพื่อศึกษาการแทรกแซงของ ไวรัสและการได้รับอินเตอร์เฟอรอน
ไวรัสที่รู้จักส่วนใหญ่มีความสามารถในการขยายพันธุ์ในเอ็มบริโอไก่ (รูปที่ 4) จะใช้ตัวอ่อนอายุตั้งแต่ 8 ถึง 14 วัน ขึ้นอยู่กับชนิดของไวรัส วิธีการติดเชื้อ และวัตถุประสงค์การวิจัย ไวรัสไข้หวัดใหญ่เพาะใน 9-10 วัน วัคซีนไข้ทรพิษใน 12 วัน คางทูมในตัวอ่อนไก่ 7 วัน การแพร่พันธุ์ของไวรัสในเอ็มบริโอไก่เกิดขึ้นในส่วนต่างๆ ของเอ็มบริโอ ซึ่งเนื่องมาจากลักษณะของไวรัสเขตร้อน เทคนิคการเพาะไวรัสในเอ็มบริโอไก่ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการเพาะปลูกภาคอุตสาหกรรม
โครงสร้างของเอ็มบริโอไก่และวิธีการติดเชื้อ: 1 - เข้าไปในน้ำคร่ำ; 2 - เข้าไปในโพรงอัลลันโทอิก; 3 - เข้าไปในถุงไข่แดง (จุลชีววิทยาและภูมิคุ้มกันวิทยา แก้ไขโดย Vorobyov A.A. - M. - 1999)
เยื่อหุ้มเซลล์นอกเอ็มบริโอชั้นนอกสุดซึ่งอยู่ติดกับเปลือกหรือเนื้อเยื่อของมารดา จึงเป็นที่แลกเปลี่ยนระหว่างเอ็มบริโอและสิ่งแวดล้อม เรียกว่า คอรีออน.ในสายพันธุ์ที่วางไข่ หน้าที่หลักของคอรีออนคือการแลกเปลี่ยนก๊าซทางเดินหายใจ ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม คอรีออนเกี่ยวข้องกับการหายใจและโภชนาการ การขับถ่าย การกรอง และการสังเคราะห์สาร ในสิ่งมีชีวิตดึกดำบรรพ์ คอรีออนเป็นเยื่อหุ้มทุติยภูมิ และในสิ่งมีชีวิตขั้นสูง ถือเป็นเยื่อหุ้มของทารกในครรภ์ ช่องระหว่างคอรีออนและแอมเนียนคือช่องคอริโอแอมนิโอติก
แอมเนียน(กรีก Amnion) ถุงน้ำคร่ำหรือเยื่อน้ำ - หนึ่งในเยื่อหุ้มตัวอ่อนในตัวอ่อนของสัตว์เลื้อยคลาน นก และสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม
ตามวิวัฒนาการแล้ว น้ำคร่ำเกิดขึ้นเพื่อปกป้องเอ็มบริโอไม่ให้แห้งในระหว่างการพัฒนานอกสภาพแวดล้อมทางน้ำ ดังนั้น สัตว์มีกระดูกสันหลังที่วางไข่ (สัตว์เลื้อยคลานและนก) รวมถึงสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่สืบเชื้อสายมาจากสัตว์เลื้อยคลาน จึงถูกจัดประเภทเป็นน้ำคร่ำ (“สัตว์ที่มีเยื่อหุ้มไข่”) คลาสก่อนหน้านี้และซูเปอร์คลาสของสัตว์มีกระดูกสันหลัง (เซฟาโลคอร์ดาต ไซโคลสโตม ปลา สัตว์ครึ่งบกครึ่งน้ำ) วางไข่ในสภาพแวดล้อมทางน้ำ ดังนั้นจึงไม่จำเป็นต้องใช้เปลือกน้ำ สัตว์ประเภทนี้จะรวมกันเป็นกลุ่มอะนัมเนีย น้ำคร่ำไม่จำเป็นต้องมีสภาพแวดล้อมทางน้ำสำหรับการสืบพันธุ์และการพัฒนาในระยะแรกต่างจากภาวะอะนัมเนีย ดังนั้น น้ำคร่ำจึงไม่ติดอยู่กับแหล่งน้ำ นี่คือบทบาทเชิงวิวัฒนาการของแอมเนียน
ในช่วงที่สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมกำเนิด เยื่อหุ้มน้ำจะแตก น้ำไหลออกมา และน้ำคร่ำที่หลงเหลืออยู่บนร่างกายของทารกแรกเกิดมักถูกเรียกว่า “เสื้อเชิ้ต” ซึ่งเป็นสัญลักษณ์แห่งความโชคดีและความเชื่อโชคลางอื่นๆ ทุกที่มาตั้งแต่สมัยโบราณ ครั้ง (โดยเฉพาะสุภาษิตรัสเซียเกี่ยวกับผู้ที่ "เกิดในเสื้อเชิ้ต")
Allantois (จากภาษากรีก allantoeids - รูปไส้กรอก) เป็นอวัยวะระบบทางเดินหายใจของตัวอ่อนของสัตว์มีกระดูกสันหลังชั้นสูง เยื่อหุ้มเซลล์ที่พัฒนาจากส่วนหลังของเอ็มบริโอ นอกจากนี้อัลลันตัวส์ยังเกี่ยวข้องกับการแลกเปลี่ยนก๊าซระหว่างเอ็มบริโอและ สิ่งแวดล้อมและปล่อยของเสียที่เป็นของเหลว อัลลันตัวส์ร่วมกับเยื่อหุ้มตัวอ่อนอื่นๆ ได้แก่ น้ำคร่ำและคอรีออน เป็นลักษณะเฉพาะของสัตว์มีกระดูกสันหลังชั้นสูง เช่น สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม นก และสัตว์เลื้อยคลาน
ในนกและสัตว์เลื้อยคลานที่วางไข่ อัลลันตัวส์จะเจริญเติบโตรอบๆ เอ็มบริโอตามผนังเปลือก ในชั้นนอกที่เรียกว่าเมโซเดิร์ม มันสร้างเครือข่ายหลอดเลือดที่กว้างขวางซึ่งมันจะมีปฏิสัมพันธ์ด้วย สภาพแวดล้อมภายนอก- ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม อัลลันตัวส์เป็นส่วนหนึ่งของสายสะดือ
มีหลายวิธีในการติดเชื้อเอ็มบริโอไก่ที่กำลังพัฒนา: บนเยื่อหุ้ม chorioallantoic ในช่องอัลลันโทอิกและน้ำคร่ำ ถุงไข่แดง และร่างกายของเอ็มบริโอ
การติดเชื้อของเยื่อหุ้ม chorioallantoic ใช้ในการแยกและเพาะเลี้ยงไวรัสที่ก่อตัวเป็นแผ่นโลหะบนเยื่อหุ้มเซลล์ (ไวรัสวัคซีน, ไข้ทรพิษ, เริม) ก่อนการติดเชื้อ ไข่จะถูกตรวจสอบโดยใช้กล้องส่องไข่ และเส้นขอบของช่องอากาศและเยื่อหุ้มเซลล์คอริโออัลลานโตอิกจะถูกร่างด้วยดินสอ พื้นผิวของไข่เหนือช่องอากาศและบริเวณที่เกิดการติดเชื้อจะถูกเช็ดด้วยแอลกอฮอล์เผารักษาด้วยไอโอดีนและทำรูในช่องของถุงลม
บริเวณที่มีการติดเชื้อ เปลือกจะถูกเอาออกเพื่อไม่ให้เยื่อหุ้มชั้นนอกเสียหาย ซึ่งจะถูกเจาะด้วยเข็มสั้นที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว เพื่อไม่ให้เยื่อหุ้มชั้นคอริโออัลลานโตอิกเสียหาย อากาศจากช่องของถุงลมจะถูกดูดออกไป วัสดุไวรัส (0.05 - 0.2 มล.) ถูกนำไปใช้กับเมมเบรน chorioallantoic ด้วยเข็มฉีดยา tuberculin ด้วยเข็มสั้นหรือปิเปตปาสเตอร์ รูในเปลือกหุ้มด้วยแก้วครอบที่ปลอดเชื้อหรือเปลือกที่เลื่อยออกมาชิ้นเดียวกัน และปิดขอบด้วยพาราฟินหลอมเหลว ตัวอ่อนที่ติดเชื้อจะถูกวางในแนวนอนบนขาตั้งและฟักในเทอร์โมสตัท ตัวอ่อนจะถูกผ่าไม่ช้ากว่า 48 ชั่วโมงของการฟักตัว บนเยื่อหุ้มที่ติดเชื้อจะพบจุดทึบแสงสีขาวที่มีรูปร่างต่าง ๆ (โล่)
การติดเชื้อในช่องอัลลันโทอิก- ไวรัสที่แพร่เข้าไปในอัลลันโทอิสจะทวีคูณในเซลล์เอนโดเดอร์มอล จากนั้นจึงผ่านเข้าไปในของเหลวอัลลันโทอิก การติดเชื้อจะดำเนินการด้วยวิธีต่อไปนี้: การเจาะจะทำในเปลือกเหนือช่องอากาศด้วยปลายมีดผ่าตัดหรือกรรไกรหลังจากนั้นจึงสอดเข็มที่มีเข็มฉีดยาเข้าไปในรูในแนวตั้งซึ่งผ่านเข้าไปในรู chorioallantoic เมมเบรนและเข้าสู่โพรง allantoic วัสดุจะถูกฉีดในปริมาตร 0.1 มล. และรูที่เต็มไปด้วยพาราฟิน
การติดเชื้อในถุงไข่แดงเพื่อจุดประสงค์นี้ จะใช้ตัวอ่อนอายุ 5 ถึง 10 วัน ที่พบบ่อยที่สุดคือการติดเชื้อสองวิธี ตามข้อแรก วัสดุจะถูกแนะนำผ่านน่านฟ้า มีการทำรูตรงกลางไข่วางบนขาตั้งโดยให้ปลายทื่อไปทางขวาและสอดเข็มที่ติดกับกระบอกฉีดยาเข้าไปในรูในทิศทางแนวตั้ง โพรงอัลลันโทอิกเข้าไปในไข่แดง สามารถฉีดสารที่มีไวรัสได้ตั้งแต่ 0.1 ถึง 0.5 มิลลิลิตรลงในถุงไข่แดง หลังการติดเชื้อ รูในเปลือกจะเต็มไปด้วยพาราฟิน และวางตัวอ่อนไว้ในเทอร์โมสตัท ตามวิธีที่สองที่ขอบของช่องอากาศด้านข้างที่มีไข่แดงอยู่ (ด้านตรงข้ามกับตัวอ่อน) จะมีการเจาะทะลุในเปลือกซึ่งมีการนำวัสดุติดเชื้อเข้ามา ทิศทางของเข็มควรหันไปทางกึ่งกลางของไข่
ตัวอ่อนไก่ที่ติดเชื้อไวรัสจะถูกนำไปฟักในตู้ฟักเป็นเวลา 2-3 วัน ขึ้นอยู่กับลักษณะของไวรัสที่แนะนำ สำหรับการพัฒนาไวรัสจากตัวอย่างที่นำมาจากผู้ป่วย (เช่น ผ้าเช็ดโพรงจมูกที่ใช้วินิจฉัยไข้หวัดใหญ่) เอ็มบริโอไก่จะมีสภาพแวดล้อมที่ดี ตามประเภทของการเปลี่ยนแปลงในเนื้อเยื่อของเยื่อหุ้ม chorioallantoic เราสามารถระบุได้โดยตรงว่าเรากำลังเผชิญกับไวรัสชนิดใด ไวรัสไข้ทรพิษและเริมทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงที่มีลักษณะเฉพาะอย่างมาก ไวรัสบางชนิดแพร่พันธุ์ได้หนาแน่นมากใน ผ้าต่างๆตัวอ่อนไก่และให้ แหล่งที่มาของวัสดุเพื่อเตรียมแอนติเจนของไวรัสที่จำเป็นสำหรับ การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการโรคไวรัส ไวรัสที่แพร่กระจายในเอ็มบริโอไก่ถูกนำมาใช้เป็นวัตถุดิบในการผลิตวัคซีนฉีดวัคซีนจำนวน 18 ชนิด
ถึงอย่างไรก็ตาม ด้านบวกการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่แพร่หลายในห้องปฏิบัติการไวรัสวิทยาสมัยใหม่ ตัวอ่อนของไก่ในหลายกรณียังคงรักษาความเป็นอันดับหนึ่งและยังคงให้บริการต่อไป วัสดุคลาสสิกสำหรับการทำงาน ข้อบ่งชี้ของไวรัสในเอ็มบริโอไก่นั้นเกิดจากการตายของเอ็มบริโอ ปฏิกิริยาการสร้างเม็ดเลือดแดงเชิงบวกบนกระจกที่มีน้ำอัลลันโทอิกหรือน้ำคร่ำ โดยการก่อตัวของรอยโรคโฟกัส (“แผ่นโลหะ”) บนเยื่อหุ้มคอรีออน-อัลลันโทอิก เช่นเดียวกับ ในอาร์เอชเอ
สารบัญหัวข้อ "การเพาะเลี้ยงแบคทีเรีย วิธีการเพาะเลี้ยงแบคทีเรีย สัญญาณของอาณานิคม":เซลล์บางประเภทไม่สามารถเติบโตได้ในรูปของโมโนลอน ในบางกรณี การรักษาเซลล์ที่แตกต่างสามารถทำได้เฉพาะในเท่านั้น วัฒนธรรมอวัยวะ- โดยปกติจะเป็นเนื้อเยื่อแขวนลอยที่มีหน้าที่พิเศษหรือเรียกอีกอย่างว่าการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อที่ยังมีชีวิต
เอ็มบริโอไก่(รูปที่ 11-20) เกือบจะเป็นแบบจำลองในอุดมคติสำหรับการเพาะไวรัสบางชนิด (เช่น ไข้หวัดใหญ่และหัด) ช่องปิดของเอ็มบริโอป้องกันการแทรกซึมของจุลินทรีย์จากภายนอกตลอดจนการพัฒนาตามธรรมชาติ การติดเชื้อไวรัส- เอ็มบริโอใช้สำหรับการแยกไวรัสเบื้องต้นจากสารทางพยาธิวิทยา เพื่อส่งต่อและเก็บรักษา ตลอดจนให้ได้ไวรัสตามปริมาณที่ต้องการ เชื้อโรคบางชนิด (เช่นไวรัสเริม) ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงลักษณะเฉพาะ (โรคสามารถรับรู้ได้) การติดเชื้อจะเกิดขึ้นที่เยื่อหุ้มเซลล์ chorion-allantoic ในช่องน้ำคร่ำหรือ allantoic หรือในถุงไข่แดง
การติดเชื้อไวรัสบนเยื่อหุ้มเซลล์ Chorion-Allantoic- โดยปกติจะใช้ตัวอ่อนอายุ 10-12 วัน ไข่จะถูกมองด้วยแสงที่ส่องผ่าน ตำแหน่งของถุงลมจะถูกสังเกต และเลือกบริเวณที่ไม่มีเส้นเลือด ค่อยๆ เอาเปลือกออกอย่างระมัดระวัง ปล่อยเปลือกด้านนอกออกแล้วลอกออกด้วยแรงกดเบาๆ จากนั้นเจาะรูที่ขอบถุงลม เมื่อดูดผ่านรูนี้ เมมเบรนของคอรีออน-อัลลานโตอิกจะถูกลอกออกจากเมมเบรนด้านนอก ใช้วัสดุทดสอบที่ปราศจากแบคทีเรียและโปรโตซัว (ผ่านตัวกรองแบคทีเรียและบำบัดด้วยสารฆ่าเชื้อแบคทีเรีย) การติดเชื้อในช่องน้ำคร่ำ โดยทั่วไปแล้ว จะใช้ตัวอ่อนอายุ 7-14 วัน ซึ่งหลังจากแยกเยื่อหุ้ม chorionic-allantoic (ดูด้านบน) แล้ว ช่องเปิดจะขยายออก เยื่อหุ้มน้ำคร่ำจะถูกจับด้วยแหนบแล้วเอาออกผ่านเยื่อหุ้ม chorionic-allantoic โดยวัสดุทดสอบจะถูกนำเข้าไปในช่องน้ำคร่ำ
การติดเชื้อไวรัสในช่องอัลลันโทอิก- เอ็มบริโออายุ 10 วันจะติดเชื้อผ่านรูที่สร้างในเปลือกและเยื่อใต้ผิวหนัง (ดูด้านบน)
การติดเชื้อไวรัสในถุงไข่แดง- จะใช้ตัวอ่อนอายุ 3-8 วัน ซึ่งในวัยนี้ถุงไข่แดงจะครอบครองเกือบทั้งโพรงไข่ การติดเชื้อจะดำเนินการผ่านรูที่ทำไว้ในถุงลม
ข้าว. 11-20. การแสดงแผนผังของตัวอ่อนลูกไก่ที่กำลังพัฒนา.
เนื้อหาสามารถใช้เป็นวัสดุที่มีไวรัสได้ ถุงไข่แดง, น้ำอัลแลนโทอิกและน้ำคร่ำหรือตัวอ่อนทั้งหมด หั่นเป็นชิ้น ๆ พร้อมกับเนื้อเยื่อโดยรอบ เพื่อระบุลักษณะรอยโรคบนเยื่อหุ้มเซลล์ chorionic-allantoic เปลือกและเยื่อหุ้มชั้นนอกจะถูกเอาออก จากนั้นเมมเบรนจะถูกเอาออกและวางในน้ำปลอดเชื้อ มีการศึกษาธรรมชาติของรอยโรคบนพื้นหลังสีเข้ม
สวัสดีตอนบ่ายผู้อ่านที่รัก! วันนี้เราจะให้คำอธิบาย แสดงภาพถ่ายและวิดีโอเกี่ยวกับพัฒนาการของไก่ในไข่ในแต่ละวันระหว่างการฟักที่บ้านและในฟาร์มสัตว์ปีก มีการปฏิบัติอย่างมั่นใจทั้งในระดับโรงงานและในฟาร์มส่วนตัว
แต่ถึงแม้จะมีการใช้อย่างแพร่หลาย แต่ก็มีน้อยคนที่คิดถึง กลไกที่ซับซ้อนวางลงในระดับพันธุกรรมทำให้มั่นใจในการเจริญเติบโตและพัฒนาการของไก่
ยังคงมีความเห็นว่าลูกไก่เติบโตจากไข่แดง ในบทความนี้คุณจะได้เรียนรู้ความลับทั้งหมดที่ซ่อนอยู่และความหมาย "แย่มาก" ที่ซ่อนอยู่ภายใต้คำว่า allantois ในไก่และน้ำคร่ำในไก่และสิ่งที่พวกเขาทำหน้าที่
พัฒนาการของลูกไก่เริ่มต้นด้วยบลาสโตดิสก์ Blasodisk เป็นก้อนเล็ก ๆ ของไซโตพลาสซึมที่อยู่บนพื้นผิวของไข่แดง ที่ตำแหน่งของบลาสโตดิสก์ ความหนาแน่นของไข่แดงจะต่ำกว่ามาก ซึ่งส่งผลให้ไข่แดงลอยอยู่ตลอดเวลาโดยให้บลาสโตดิสก์ขึ้นด้านบน
คุณสมบัตินี้ให้ความร้อนที่ดีขึ้นในระหว่างกระบวนการฟักไข่ บลาสโตดิสที่ปฏิสนธิจะเริ่มแบ่งตัวในขณะที่ยังอยู่ในตัวของไก่ และเมื่อถึงเวลาที่วาง มันก็จะถูกล้อมรอบด้วยบลาสโตเดิร์มโดยสมบูรณ์แล้ว บลาสโตดิสก์มีลักษณะเป็นจุดสีขาวเล็กๆ ขนาดประมาณ 2 มม.
รัศมีแสงที่ล้อมรอบจานเชื้อโรคในวงแหวนคือบลาสโตเดิร์ม
เมื่อไข่เข้าสู่สภาพแวดล้อมที่เหมาะสมและหยุดลงหลังจากวางไข่ การแบ่งเซลล์จะดำเนินต่อไป
คุณควรรู้:ตรงกันข้ามกับความเชื่อที่นิยมว่าการฟักไข่สามารถทำได้ตั้งแต่วันที่ 6 ของการฟักตัวเท่านั้น การพัฒนาของบลาสโตเดิร์มจะมองเห็นได้ชัดเจนหลังจาก 18-24 ชั่วโมงนับจากเริ่มฟักตัว เมื่อถึงจุดนี้ จะมองเห็นความมืดมิดได้ชัดเจนขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 5–6 มม. และเคลื่อนตัวได้ง่ายเมื่อพลิกไข่
ในวันที่ 2-3 ของการฟักตัว การพัฒนาของเยื่อหุ้มเซลล์ชั่วคราวจะเริ่มขึ้น:
แท้จริงแล้วทั้งหมดนี้เป็นอวัยวะชั่วคราวที่ออกแบบมาเพื่อทำหน้าที่รับรองกิจกรรมสำคัญของเอ็มบริโอจนกระทั่งถึงการก่อตัวขั้นสุดท้าย
เป็นเปลือกที่ปกป้องเอ็มบริโอจากการกระแทกทางกายภาพและทำให้แห้ง เนื่องจากการเติมของเหลว น้ำคร่ำของลูกไก่จะควบคุมปริมาณของเหลวตามอายุของตัวอ่อน
พื้นผิวเยื่อบุผิวของถุงน้ำคร่ำสามารถเติมน้ำลงในโพรงของตัวอ่อนได้และยังช่วยให้ของเหลวไหลออกเมื่อโตขึ้น
อวัยวะชั่วคราวชนิดหนึ่งที่ทำหน้าที่หลายอย่าง:
ในระหว่างกระบวนการเจริญเติบโตของลูกไก่ Allantois จะสร้างเครือข่ายหลอดเลือดที่แตกแขนงซึ่งเรียงเป็นแนวบนพื้นผิวด้านในทั้งหมดของไข่และเชื่อมต่อกับลูกไก่ผ่านสายสะดือ
การแลกเปลี่ยนออกซิเจนในไข่ ขึ้นอยู่กับระยะการพัฒนาของไก่ มีกลไกที่แตกต่างกัน ในระยะเริ่มแรกของการพัฒนา ออกซิเจนจะมาจากไข่แดงโดยตรงไปยังเซลล์บลาสโตเดิร์ม
เมื่อระบบไหลเวียนโลหิตมาถึง ออกซิเจนจะเข้าสู่กระแสเลือดแม้จะมาจากไข่แดงก็ตาม แต่ไข่แดงไม่สามารถรับประกันการหายใจของสิ่งมีชีวิตที่กำลังเติบโตอย่างรวดเร็วได้อย่างเต็มที่
ตั้งแต่วันที่ 6 เป็นต้นไป หน้าที่ในการให้ออกซิเจนจะค่อยๆ ถ่ายโอนไปยังอัลลันตัวส์ การเจริญเติบโตของมันเริ่มต้นไปทางช่องอากาศของไข่และเมื่อไปถึงแล้วจะครอบคลุมพื้นที่ภายในของเปลือกที่ใหญ่ขึ้นเรื่อย ๆ ยิ่งลูกไก่โตขึ้น พื้นที่ที่อัลลันตัวส์ก็ครอบคลุมมากขึ้นเท่านั้น
เมื่อส่องกล้องจะมีลักษณะเป็นตาข่ายสีชมพู ปกคลุมไข่ทั้งหมดและปิดด้านที่แหลมคม
ในวันแรกของการพัฒนา เอ็มบริโอจะใช้สารอาหารจากโปรตีนและไข่แดง เนื่องจากไข่แดงประกอบด้วยแร่ธาตุ ไขมัน และคาร์โบไฮเดรตที่ซับซ้อน จึงสามารถตอบสนองความต้องการเริ่มแรกของร่างกายที่กำลังเติบโตได้
หลังจากปิดอัลลันตัวส์ (วันที่ 11 ของการพัฒนา) การกระจายฟังก์ชันจะเกิดขึ้น เอ็มบริโอจะมีขนาดใหญ่ขึ้นและจะอยู่ตามแนวแกนยาวของไข่ โดยให้ส่วนหัวหันไปทางปลายทื่อ โปรตีน ณ จุดนี้ จะเข้มข้นอยู่ที่ปลายแหลมของไข่
น้ำหนักของลูกไก่ประกอบกับแรงกดของอัลลันตัวส์ช่วยให้โปรตีนมีการเคลื่อนตัวและการซึมผ่านของน้ำคร่ำเข้าไปในปากของเอ็มบริโอ กระบวนการที่ต่อเนื่องนี้ช่วยให้ลูกไก่เติบโตและพัฒนาการอย่างรวดเร็วในแต่ละวันระหว่างการฟักไข่
ตั้งแต่ 13 วัน แร่ธาตุซึ่งไก่ใช้ในการพัฒนาต่อไป จะถูกส่งโดยอัลลันตัวส์จากเปลือก
คุณควรรู้: โภชนาการไก่ปกติสามารถให้ได้โดยอัลลันตัวส์ที่ปิดสนิทในไก่เท่านั้น หากปิดฝาแล้วปลายแหลมของไข่ยังมีโปรตีนที่ไม่หุ้มภาชนะ ไก่ก็จะมีสารอาหารไม่เพียงพอสำหรับการเจริญเติบโตต่อไป
เมื่อเร็ว ๆ นี้การฟักไข่ไก่ในแนวตั้งกลายเป็นเรื่องปกติมากขึ้น แต่วิธีนี้ไม่ได้ส่งผลดีที่สุดต่อพัฒนาการของไก่
ในตำแหน่งแนวตั้ง ความเอียงสูงสุดเมื่อหมุนคือ 45° การเอียงนี้ไม่เพียงพอสำหรับการเจริญเติบโตตามปกติของอัลลันตัวส์และการปิดตัวทันเวลา โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับไข่ขนาดใหญ่
เมื่อฟักในแนวนอน จะมีการหมุน 180° ซึ่งส่งผลดีต่อการเจริญเติบโตของอัลลันตัวส์ และผลที่ตามมาคือโภชนาการของลูกไก่
ตามกฎแล้ว ขนปุยที่ฟักโดยวางไข่ในแนวตั้งจะมีน้ำหนักน้อยกว่าขนที่ฟักโดยวางไข่ในแนวนอนถึง 10%
การพลิกไข่ระหว่างการฟักไข่เป็นสิ่งจำเป็นในทุกขั้นตอนของการพัฒนา ยกเว้นวันแรกและสองวันแรกสุดท้าย ในวันแรกจำเป็นต้องมีการให้ความร้อนอย่างเข้มข้นกับบลาสโตดิสก์และในวันสุดท้ายเสียงแหลมเล็ก ๆ ได้เข้ามาอยู่ในตำแหน่งที่จะทะลุผ่านเปลือกแล้ว
ในช่วงเริ่มแรกของการพัฒนา การเปลี่ยนไข่จะช่วยลดความเสี่ยงที่บลาสโตเดิร์มหรือแอมเนียนจะเกาะติดอยู่ด้านในของเปลือก
การหมุนยังช่วย:
หลังจากอ่านบทความแล้วเราสามารถตัดสินความซับซ้อนของกระบวนการที่เกิดขึ้นกับกระทงหรือไก่ตัวเล็กในระหว่างการพัฒนาจากหลายเซลล์ไปจนถึงนกตัวเล็ก กระบวนการนี้ไม่ซับซ้อนไม่น้อยไปกว่าพัฒนาการของมนุษย์หรือลูกแมวในครรภ์ ซึ่งรับประกันสภาวะคงที่
การพัฒนาลูกไก่ในไข่ในแต่ละวันนั้นขึ้นอยู่กับสภาพภายนอกโดยสมบูรณ์ซึ่งมีการฟักตัว
เราหวังว่าทุกคนจะฟักไข่ขนปุยสีเหลือง สีเทา และขนอื่นๆ ได้สำเร็จ!
สมัครรับข้อมูลอัปเดตเว็บไซต์เพื่อเป็นคนแรกที่รู้ข่าวไก่ที่จะช่วยแก้ปัญหาทั้งหมดของคุณ
นี่คือภาพถ่ายจากผู้อ่านประจำของเรา Yulia Arepteva ไก่ฟักอยู่ใต้!
ในความคิดเห็น คุณสามารถเพิ่มรูปถ่ายไก่ไข่ ไก่โต้ง และลูกไก่ได้! หรือสัตว์ปีกชนิดอื่นๆ เราอยากรู้ว่าคุณมีเล้าไก่แบบไหน?
คุณชอบบทความนี้หรือไม่? แบ่งปันกับเพื่อน ๆ บนเครือข่ายโซเชียล: 
เข้าร่วมกับเราบน VKontakte อ่านเกี่ยวกับไก่!
